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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 提取RNA前如何除掉RNA酶~~高温灭菌121℃，2个小时是不是可以除掉RNA酶？
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风zzz

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我没有做过，但是看过师兄做的，灭菌，然后DEPC水泡24h，再用之前灭菌121℃，20min。我师兄是做转染的！
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态度决定一切！
21楼2012-11-07 21:24:56
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czcpudai

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
20楼: Originally posted by 木小默 at 2012-11-07 20:10:37
把你要用的东西全部放在depc水里过夜，12小时左右就好，然后灭菌就好了！祝你成功！

，恩确实这样做了 做了RT-PCR，目的条带都出来了，谢谢！
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22楼2012-11-07 22:42:12
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czcpudai

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
21楼: Originally posted by 风zzz at 2012-11-07 21:24:56
我没有做过，但是看过师兄做的，灭菌，然后DEPC水泡24h，再用之前灭菌121℃，20min。我师兄是做转染的！

非常感谢解答！！  看样子大家交流一下可以得出更好的答案！
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23楼2012-11-07 22:42:55
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sxxuan

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
用到的东西，EP管，枪头等要先用DEPC水浸泡过夜，再拿去灭菌的，121，30min。记得要烘干。
操作的时候小心点，一般都不会说降解很厉害的。
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你的日子如何，你的力量也必如何！
24楼2012-11-08 11:49:52
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czcpudai

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
24楼: Originally posted by sxxuan at 2012-11-08 11:49:52
用到的东西，EP管，枪头等要先用DEPC水浸泡过夜，再拿去灭菌的，121，30min。记得要烘干。
操作的时候小心点，一般都不会说降解很厉害的。

，是的，我都是这样子做的，一般是放在饭盒中浸泡的。然后倒出DEPC水，进行高压灭菌，但是烘干的时候80烘了一天都没干！ 我还想问，用DEPC水浸泡过夜，再拿去灭菌的（121，30min），烘干后，这样子的枪头或者EP管可以用多长时间或者是几次呢？？？
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25楼2012-11-08 12:26:52
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jl860822

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
耐高温的直接放200°烘烤，不耐高温的直接用DEPC处理后灭菌，建议楼主还是直接买现成的吧
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26楼2012-11-08 12:38:08
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czcpudai

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
26楼: Originally posted by jl860822 at 2012-11-08 12:38:08
耐高温的直接放200°烘烤，不耐高温的直接用DEPC处理后灭菌，建议楼主还是直接买现成的吧

是应该买那种现成的，看看往后提取的效果吧，要是不行的话就直接买现成的了~~~
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27楼2012-11-08 17:51:44
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sxxuan

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-11-09 14:16:30
引用回帖:
25楼: Originally posted by czcpudai at 2012-11-08 12:26:52
，是的，我都是这样子做的，一般是放在饭盒中浸泡的。然后倒出DEPC水，进行高压灭菌，但是烘干的时候80烘了一天都没干！ 我还想问，用DEPC水浸泡过夜，再拿去灭菌的（121，30min），烘干后，这样子的枪头 ...

不是都是一次性的吗？还能重复用？
我一般是提取一次就用一批，或者开封后放在超净工作台。但如果超过一周不用，我还是会重新处理的。
不过我后来懒了，不用DEPC水处理，直接灭菌30min，提取出来也没有降解，但前提是我尽快逆转录成cDNA放-80保存。用途不一样的RNA，仅供参考。
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你的日子如何，你的力量也必如何！
28楼2012-11-09 09:25:17
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czcpudai

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
28楼: Originally posted by sxxuan at 2012-11-09 09:25:17
不是都是一次性的吗？还能重复用？
我一般是提取一次就用一批，或者开封后放在超净工作台。但如果超过一周不用，我还是会重新处理的。
不过我后来懒了，不用DEPC水处理，直接灭菌30min，提取出来也没有降解，但前 ...

恩  好的！ 我也是提取出来后直接做RT的~~~
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29楼2012-11-09 10:18:48
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