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梦不落张

铜虫 (小有名气)

[求助] 组织分布样品制备方法

最近在做五种成分在大鼠肾组织分布实验,样品制备方法为:将大鼠肾称重,加4倍10%氨水-生理盐水,剪碎匀浆,取组织匀浆液400ul,加500ng/ml混标和内标各50ul,加2倍量甲醇(1ml),涡旋10min,离心(13000rpm,10min,4℃)后取上清液1ml,加10%氨水-生理盐水1ml,加3ml乙酸乙酯,涡旋10分钟后离心(3000rpm,10min,4℃),取上清液50℃氮气吹干,加500ul10%乙腈复溶,13000rpm,4℃离心15min,取上清液进样。
问题:样品复溶离心后溶液上层有混悬液体,曾试过用0.22um滤膜过滤进样但过滤后两种成分检测不出。也试过只取中间澄清层进样,但柱子前端筛板堵了,求各位高手相助解决下样品制备方法啊!
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wangyuanji

银虫 (小有名气)


PSA: 金币+1, 赞 2012-12-06 13:00:56
乙醚麻醉处死大鼠,经左心室心脏灌注,至流出液几乎无血色。取脑。剥除脑膜,称重,按1:1(w/v)加入生理盐水手动匀浆,匀浆液置于5毫升EP管中,12000RPM/5MIN。取上清500微升,加有机溶剂萃取,涡旋,离心,取上层有机相,减压挥干溶剂,少量甲醇复溶(浓集),涡旋,高速离心,进样测定。

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心态比能力重要
5楼2012-11-07 16:13:08
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wangyuanji

银虫 (小有名气)


jiangchunyong: 金币+1, 谢谢 2012-11-07 14:55:00
没有做过肾脏的,做过脑的。挥干溶剂,复溶,进样前高速离心,没有混悬。会不会是肾脏特有的不易被高速离心去除掉的油状物质?不然,你试试肾脏灌注,将肾脏中残余的尿液等物质冲洗干净,再进行匀浆处理。没有做过,所以只能说这么多。祝你好运!
心态比能力重要
2楼2012-11-06 22:04:49
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梦不落张

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by wangyuanji at 2012-11-06 22:04:49
没有做过肾脏的,做过脑的。挥干溶剂,复溶,进样前高速离心,没有混悬。会不会是肾脏特有的不易被高速离心去除掉的油状物质?不然,你试试肾脏灌注,将肾脏中残余的尿液等物质冲洗干净,再进行匀浆处理。没有做过, ...

可以具体说下你怎么处理的脑吗
3楼2012-11-07 08:54:37
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kkbyb

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
使用的复溶溶剂溶解性对待测物来说合适吗?
4楼2012-11-07 14:39:48
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