应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 药代动力学 » 组织分布样品制备方法
141/2返回列表12下一页
查看: 1631  |  回复: 13
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

梦不落张

铜虫 (小有名气)

[求助] 组织分布样品制备方法

最近在做五种成分在大鼠肾组织分布实验，样品制备方法为：将大鼠肾称重，加4倍10%氨水-生理盐水，剪碎匀浆，取组织匀浆液400ul，加500ng/ml混标和内标各50ul，加2倍量甲醇(1ml)，涡旋10min，离心（13000rpm，10min，4℃）后取上清液1ml，加10%氨水-生理盐水1ml，加3ml乙酸乙酯，涡旋10分钟后离心（3000rpm，10min，4℃），取上清液50℃氮气吹干，加500ul10%乙腈复溶，13000rpm,4℃离心15min,取上清液进样。
问题：样品复溶离心后溶液上层有混悬液体，曾试过用0.22um滤膜过滤进样但过滤后两种成分检测不出。也试过只取中间澄清层进样，但柱子前端筛板堵了，求各位高手相助解决下样品制备方法啊!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-11-06 11:01:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

wangyuanji

银虫 (小有名气)
★
PSA: 金币+1, 赞 2012-12-06 13:00:56
乙醚麻醉处死大鼠，经左心室心脏灌注，至流出液几乎无血色。取脑。剥除脑膜，称重，按1:1（w/v）加入生理盐水手动匀浆，匀浆液置于5毫升EP管中，12000RPM/5MIN。取上清500微升，加有机溶剂萃取，涡旋，离心，取上层有机相，减压挥干溶剂，少量甲醇复溶（浓集），涡旋，高速离心，进样测定。
赞一下(1人) 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

梦不落张
心态比能力重要
5楼2012-11-07 16:13:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangyuanji

银虫 (小有名气)
我是同时测定四种成分，有水溶性的，也有脂溶性的。之前我做的时候也没有做心脏灌注，后来老师说，脑中有残余血液，会影响脑组织中待测成分的测定，所以我就采用了灌注，效果很明显，取出的脑组织明显变白。向你请教一下啊，如果测定的化合物水溶性较差，取上清有问题吗？你是怎么考虑的呢？
赞一下(1人) 回复此楼
心态比能力重要
8楼2012-11-08 20:16:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

梦不落张

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by wangyuanji at 2012-11-08 20:16:13
我是同时测定四种成分，有水溶性的，也有脂溶性的。之前我做的时候也没有做心脏灌注，后来老师说，脑中有残余血液，会影响脑组织中待测成分的测定，所以我就采用了灌注，效果很明显，取出的脑组织明显变白。向你请教 ...

如果你有脂溶性的成分，最好不要取组织匀浆液的生理盐水上清，我做过实验，取上清和取组织匀浆液的制样后分析，取上清的含量要明显低于取组织匀浆液的。
赞一下(1人) 回复此楼
9楼2012-11-12 15:40:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

wangyuanji

银虫 (小有名气)
★
jiangchunyong: 金币+1, 谢谢 2012-11-07 14:55:00
没有做过肾脏的，做过脑的。挥干溶剂，复溶，进样前高速离心，没有混悬。会不会是肾脏特有的不易被高速离心去除掉的油状物质？不然，你试试肾脏灌注，将肾脏中残余的尿液等物质冲洗干净，再进行匀浆处理。没有做过，所以只能说这么多。祝你好运！
赞一下 回复此楼
心态比能力重要
2楼2012-11-06 22:04:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

梦不落张

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by wangyuanji at 2012-11-06 22:04:49
没有做过肾脏的，做过脑的。挥干溶剂，复溶，进样前高速离心，没有混悬。会不会是肾脏特有的不易被高速离心去除掉的油状物质？不然，你试试肾脏灌注，将肾脏中残余的尿液等物质冲洗干净，再进行匀浆处理。没有做过， ...

可以具体说下你怎么处理的脑吗
赞一下 回复此楼
3楼2012-11-07 08:54:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kkbyb

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
使用的复溶溶剂溶解性对待测物来说合适吗？
赞一下 回复此楼
4楼2012-11-07 14:39:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

梦不落张

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by kkbyb at 2012-11-07 14:39:48
使用的复溶溶剂溶解性对待测物来说合适吗？

复溶溶剂是初始流动相
赞一下 回复此楼
6楼2012-11-08 14:34:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

梦不落张

铜虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
5楼: Originally posted by wangyuanji at 2012-11-07 16:13:08
乙醚麻醉处死大鼠，经左心室心脏灌注，至流出液几乎无血色。取脑。剥除脑膜，称重，按1:1（w/v）加入生理盐水手动匀浆，匀浆液置于5毫升EP管中，12000RPM/5MIN。取上清500微升，加有机溶剂萃取，涡旋，离心，取上层 ...

谢了，你要测定的化合物是水溶性的吗？我看你是取得匀浆液的上清。我的实验没做心脏灌注，因为取了血样，有什么影响吗？
赞一下 回复此楼
7楼2012-11-08 14:41:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangyuanji

银虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 梦不落张 at 2012-11-12 15:40:41
如果你有脂溶性的成分，最好不要取组织匀浆液的生理盐水上清，我做过实验，取上清和取组织匀浆液的制样后分析，取上清的含量要明显低于取组织匀浆液的。...

谢谢你的回复啊！确实，我打算取组织匀浆液测定试试。因为四种成分中有两种没有检测到。
赞一下 回复此楼
心态比能力重要
10楼2012-11-12 20:30:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 梦不落张 的主题更新
141/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 【考研调剂】化学专业 281分，一志愿四川大学，诚心求调剂 +4 吃吃吃才有意义 2026-03-19 4/200 2026-03-19 13:48 by houyaoxu
[考研] 一志愿 西北大学 ，070300化学学硕，总分287，双非一本，求调剂。 +3 晨昏线与星海 2026-03-19 3/150 2026-03-19 13:36 by houyaoxu
[考研] 085601材料工程专硕求调剂 +8 慕寒mio 2026-03-16 8/400 2026-03-19 12:30 by peike
[考研] 0703化学调剂 +8 妮妮ninicgb 2026-03-15 12/600 2026-03-19 05:55 by anny19840123
[考研] 0703化学 305求调剂 +4 FY_yy 2026-03-14 4/200 2026-03-19 05:54 by anny19840123
[考研] 085410人工智能专硕317求调剂（0854都可以） +3 xbxudjdn 2026-03-18 3/150 2026-03-18 22:14 by zhq0425
[考研] 材料专业求调剂 +5 hanamiko 2026-03-18 5/250 2026-03-18 20:19 by 星空星月
[考研] 331求调剂（0703有机化学 +7 ZY-05 2026-03-13 8/400 2026-03-18 14:13 by 007_lilei
[考研] 070300化学319求调剂 +6 锦鲤0909 2026-03-17 6/300 2026-03-18 13:22 by Iveryant
[考研] 268求调剂 +6 简单点0 2026-03-17 6/300 2026-03-18 09:04 by 无际的草原
[考研] 301求调剂 +9 yy要上岸呀 2026-03-17 9/450 2026-03-18 08:58 by 无际的草原
[考研] 考研求调剂 +3 橘颂. 2026-03-17 4/200 2026-03-17 21:43 by 有只狸奴
[考研] 268求调剂 +7 好运连绵不绝 2026-03-12 8/400 2026-03-17 20:28 by xilongliang
[考研] 278求调剂 +3 Yy7400 2026-03-13 3/150 2026-03-17 08:24 by laoshidan
[考研] 274求调剂 +5 时间点 2026-03-13 5/250 2026-03-17 07:34 by 热情沙漠
[考研] 东南大学364求调剂 +5 JasonYuiui 2026-03-15 5/250 2026-03-16 21:28 by 木瓜膏
[考研] 0703一志愿211 285分求调剂 +5 ly3471z 2026-03-13 5/250 2026-03-16 16:16 by 哦哦123
[考研] 22408总分284求调剂 +3 InAspic 2026-03-13 3/150 2026-03-15 11:10 by zhq0425
[考研] 289求调剂 +3 李政莹 2026-03-12 3/150 2026-03-13 11:02 by 求调剂zz
[考研] 321求调剂（食品/专硕） +3 mxcz321 2026-03-12 6/300 2026-03-13 08:45 by xc321
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭