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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 提取得来的蛋白质不溶解于buffer，怎么办？
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peifeinini

铜虫 (正式写手)

[求助] 提取得来的蛋白质不溶解于buffer，怎么办？

用DTT提取再用丙酮把蛋白质沉淀出来，结果在用缓冲液溶解的时候只溶解了一小部分。我估计这没溶液的部分可能是角蛋白，但是这没有溶解的部分该怎么测定呢？求大侠指点，感激不尽！
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1楼 2012-11-04 23:38:42
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gjjjcjg

银虫 (小有名气)
加入添加剂试试，如果不行，多试几种
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郑学
2楼2012-11-05 00:19:50
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yongbo_liang

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
1.你的蛋白好特别啊，用DTT提，用丙酮沉淀
2.你的蛋白溶解缓冲液能不能调整一下。
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3楼2012-11-05 16:39:30
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peifeinini

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by yongbo_liang at 2012-11-05 16:39:30
1.你的蛋白好特别啊，用DTT提，用丙酮沉淀
2.你的蛋白溶解缓冲液能不能调整一下。

很特别吗？那你一般是怎么提的吖？能否交流一下？
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4楼2012-11-05 17:14:40
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yongbo_liang

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

你这样提取的蛋白是做WB还是要纯化啊？
如果 是纯化的话，很少用DTT的啊
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5楼2012-11-06 08:35:48
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peifeinini

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by yongbo_liang at 2012-11-06 08:35:48
你这样提取的蛋白是做WB还是要纯化啊？
如果 是纯化的话，很少用DTT的啊

用bio-rad 测蛋白质总量，前面要先把蛋白质提取出来，否则样品里面的非蛋白N会影响检测结果。
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6楼2012-11-06 10:24:21
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