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peifeinini

铜虫 (正式写手)

[求助] 提取得来的蛋白质不溶解于buffer,怎么办?

用DTT提取再用丙酮把蛋白质沉淀出来,结果在用缓冲液溶解的时候只溶解了一小部分。我估计这没溶液的部分可能是角蛋白,但是这没有溶解的部分该怎么测定呢?求大侠指点,感激不尽!
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gjjjcjg

银虫 (小有名气)

加入添加剂试试,如果不行,多试几种
郑学
2楼2012-11-05 00:19:50
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yongbo_liang

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
1.你的蛋白好特别啊,用DTT提,用丙酮沉淀
2.你的蛋白溶解缓冲液能不能调整一下。
3楼2012-11-05 16:39:30
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peifeinini

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by yongbo_liang at 2012-11-05 16:39:30
1.你的蛋白好特别啊,用DTT提,用丙酮沉淀
2.你的蛋白溶解缓冲液能不能调整一下。

很特别吗?那你一般是怎么提的吖?能否交流一下?
4楼2012-11-05 17:14:40
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yongbo_liang

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

你这样提取的蛋白是做WB还是要纯化啊?
如果 是纯化的话,很少用DTT的啊
5楼2012-11-06 08:35:48
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peifeinini

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by yongbo_liang at 2012-11-06 08:35:48
你这样提取的蛋白是做WB还是要纯化啊?
如果 是纯化的话,很少用DTT的啊

用bio-rad 测蛋白质总量,前面要先把蛋白质提取出来,否则样品里面的非蛋白N会影响检测结果。
6楼2012-11-06 10:24:21
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