应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » AFLP差异条带的回收再扩增
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
71/1返回列表
查看: 702  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

shucanwei

木虫 (正式写手)

[求助] AFLP差异条带的回收再扩增

诸位好，现在我现在在做从聚丙烯酰胺凝胶中回收条带，然后再做PCR，但是PCR效果很差，如附件中出现的一样，条带不明亮，请问能怎么解决。
PCR体系为：
      buffer            5
      dntp             4
       上下游引物各   1  
      DMSO          3
      Taq               0.5
      DNA              5
      水                 至50ul

     程序为：94读10min;    94读1min；58度1min;72度1min;(37cycles);    72度10min。
回复此楼

» 猜你喜欢
唯以一人治天下，不以天下奉一人。
1楼 2012-11-03 17:33:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bloodwar

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你的资料太不详细了。首先你的片段是多少，你用Taq的话第一步94度10分钟太长了吧，一般2-3min就足够了，太久酶都失活了；另外模版可增加到8ul
赞一下 回复此楼
2楼2012-11-06 01:26:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shucanwei

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by bloodwar at 2012-11-06 01:26:48
你的资料太不详细了。首先你的片段是多少，你用Taq的话第一步94度10分钟太长了吧，一般2-3min就足够了，太久酶都失活了；另外模版可增加到8ul

你好。我获得的片段在500bp左右，大小不等。谢谢你的回复。请问你做这个的实验回收率达到多少呢？能否指导我一下，谢谢。
赞一下 回复此楼
唯以一人治天下，不以天下奉一人。
3楼2012-11-07 01:14:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

peace12039088

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

将目标条带切割下来后，首先加入适量的去离子水，然后在沸水中煮5min左右，再高速离心，取上清作为模板。不知道你是怎么操作的。此外就是预变性10min，太长，3-5min就行了。还有，你的片段500bp的话，退火与延伸30s即可。
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2012-11-07 08:58:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fit3525

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

就是感觉预变性的时间太久了，5分钟就可以了，好像你的退火温度有点低~你是要做转录组分析吗？
赞一下 回复此楼
5楼2012-11-13 20:46:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shucanwei

木虫 (正式写手)
您好，谢谢回复。我做的差异表达基因的筛选，Rna水平。我下次用5min试一下。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
唯以一人治天下，不以天下奉一人。
6楼2012-11-14 21:19:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shucanwei

木虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by fit3525 at 2012-11-13 20:46:00
就是感觉预变性的时间太久了，5分钟就可以了，好像你的退火温度有点低~你是要做转录组分析吗？

我现在用三十七个循环，请问可以增加到四十五个吗？

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
唯以一人治天下，不以天下奉一人。
7楼2012-11-14 21:23:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 shucanwei 的主题更新
71/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 求化学调剂 +5 wulanna 2026-03-28 5/250 2026-03-29 23:39 by 飞行日记西
[考研] 一志愿哈尔滨工业大学材料与化工方向336分 +10 辰沐5211314 2026-03-26 10/500 2026-03-29 21:01 by 唐沐儿
[考研] 283求调剂（080500） +7 A child 2026-03-27 7/350 2026-03-29 20:46 by 唐沐儿
[考研] 296求调剂 +6 彼岸t 2026-03-29 6/300 2026-03-29 20:22 by 永字号
[考研] 329求调剂，一志愿西北工业大学，材料工程（085601） +4 小小机灵虫 2026-03-29 10/500 2026-03-29 18:20 by 无际的草原
[考研] 环境工程 085701，267求调剂 +6 minht 2026-03-29 6/300 2026-03-29 16:21 by 学员8dgXkO
[考研] 0856材料化工调剂 总分330 +14 zhubinhao 2026-03-27 14/700 2026-03-29 10:01 by Sjndkwm
[考研] 322求调剂 +7 宋明欣 2026-03-27 7/350 2026-03-28 21:27 by sanrepian
[考研] 食品工程专硕一志愿中海洋309求调剂 +4 小张zxy张 2026-03-26 8/400 2026-03-28 19:25 by lbsjt
[考研] 330一志愿中国海洋大学 化学工程 085602 有读博意愿 求调剂 +3 wywy.. 2026-03-27 4/200 2026-03-28 03:32 by fmesaito
[考研] 265求调剂 +8 小木虫085600 2026-03-27 8/400 2026-03-27 22:16 by 无际的草原
[考研] 一志愿 西北大学 总分282 英语一62 求调剂 +7 18419759900 2026-03-25 8/400 2026-03-27 16:38 by 18419759900
[考研] 085600材料与化工调剂 +10 A-哆啦Z梦 2026-03-23 16/800 2026-03-27 15:13 by caszguilin
[考研] 286求调剂 +4 lim0922 2026-03-26 4/200 2026-03-27 10:28 by guoweigw
[考研] 0703化学求调剂 +3 丹青奶盖 2026-03-26 5/250 2026-03-26 20:11 by macy2011
[考研] 总分322求生物学/生化与分子/生物信息学相关调剂 +5 星沉uu 2026-03-26 6/300 2026-03-26 19:02 by macy2011
[考研] 生物学 296 求调剂 +4 朵朵- 2026-03-26 6/300 2026-03-26 19:01 by 不吃魚的貓
[考研] 335求调剂 +4 yuyu宇 2026-03-23 5/250 2026-03-23 23:49 by Txy@872106
[考研] 一志愿国科过程所081700，274求调剂 +3 三水研0水立方 2026-03-23 3/150 2026-03-23 23:11 by MajorWen
[考研] 接收2026硕士调剂(学硕+专硕) +4 allen-yin 2026-03-23 6/300 2026-03-23 15:04 by 汪！？！
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭