24小时热门版块排行榜    

查看: 633  |  回复: 6
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

shucanwei

木虫 (正式写手)

[求助] AFLP差异条带的回收再扩增

诸位好,现在我现在在做从聚丙烯酰胺凝胶中回收条带,然后再做PCR,但是PCR效果很差,如附件中出现的一样,条带不明亮,请问能怎么解决。
PCR体系为:
      buffer            5
      dntp             4
       上下游引物各   1  
      DMSO          3
      Taq               0.5
      DNA              5
      水                 至50ul

     程序为:94读10min;    94读1min;58度1min;72度1min;(37cycles);    72度10min。
回复此楼
唯以一人治天下,不以天下奉一人。
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

peace12039088

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

将目标条带切割下来后,首先加入适量的去离子水,然后在沸水中煮5min左右,再高速离心,取上清作为模板。不知道你是怎么操作的。此外就是预变性10min,太长,3-5min就行了。还有,你的片段500bp的话,退火与延伸30s即可。
4楼2012-11-07 08:58:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 shucanwei 的主题更新
信息提示
请填处理意见