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448935271

银虫 (小有名气)

[求助] 荧光PCR

在做QPCR的时候出现了非特异性扩增,请问有哪些原因会造成这个现象啊?
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万物皆有毒,只要剂量足
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

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448935271: 金币+1, 有帮助 2012-11-02 13:40:59
引物设计不好,或者没有找到引物最佳退火温度。建议做个退火温度梯度来选择反应时的退火温度。实在不行最好重新设计引物。
2楼2012-11-01 15:03:28
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axiye

新虫 (小有名气)

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提高退火温度,拉个温度梯度,10度左右的,每两度一管
3楼2012-11-01 15:06:07
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448935271

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-11-01 15:03:28
引物设计不好,或者没有找到引物最佳退火温度。建议做个退火温度梯度来选择反应时的退火温度。实在不行最好重新设计引物。

前一次也是用这对引物,特异性不错,但这次却出现了问题
万物皆有毒,只要剂量足
4楼2012-11-01 15:25:06
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lixlei

禁虫 (初入文坛)

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5楼2012-11-01 16:13:40
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448935271

银虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by lixlei at 2012-11-01 16:13:40
cDNA质量是否有问题?

这个是用试剂盒提取的
万物皆有毒,只要剂量足
6楼2012-11-01 16:21:02
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静安jingan

铁杆木虫 (职业作家)

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引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-11-01 15:03:28
引物设计不好,或者没有找到引物最佳退火温度。建议做个退火温度梯度来选择反应时的退火温度。实在不行最好重新设计引物。

同意,我最近的pcr就是做梯度测退火温度,但是还是没有找到,非特异性太多
让复杂的事情变简单,简单的事情更简单
7楼2012-11-01 17:17:47
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