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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » HPLC 用C18反相柱鉴定蛋白纯度，蛋白峰与溶剂峰混在一起怎么办？
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minmin-911

铜虫 (小有名气)

[求助] HPLC 用C18反相柱鉴定蛋白纯度，蛋白峰与溶剂峰混在一起怎么办？ 已有1人参与

用HPLC C18反相柱鉴定纯化蛋白质纯度，如图所示，是不是我的目标蛋白的极性太强，导致与溶剂峰混在一起，出峰太早？28min的峰为流动相的峰。那该怎么解决这个问题呢？菜鸟求救啊！
图1为空白对照： Tris-HCL 含NaCl 0.12M (pH 7.2)
图2为样品溶于Tris-HCL 含NaCl 0.12M (pH 7.2)

HPLC柱子：C18, 4.6 mm × 250 mm, 300 A
洗脱液：
Solvent A，1%乙酸水溶液
Solvent B，100%甲醇
洗脱条件：
0-10min 10%-30% B
10-20min 30%-70% B
20-40min 70% B
流速为 1.0 ml/min
检测波长为：280 nm
目标蛋白分子量为25KDa, pI为5左右。

图1 对照.jpg



图2 样品.jpg
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1楼 2012-10-30 16:47:08
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cerf_volant

新虫 (初入文坛)
你好，想问一下你这个蛋白最后跑出来了吗？我现在也在做类似的东西，想问下你这个图谱里面2min多出的峰是什么最后搞清楚了吗？是蛋白极性太大不保留，还是什么其他杂质呢？谢谢您~
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12楼2015-09-29 12:20:18
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小娜-小宇

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
听不到: 金币+1, 感谢您的解答，欢迎常来分析版 2012-10-31 10:19:08
可以正相色谱分析呀，跑反相受溶剂峰影响分离度明显很低，根本说是分不开的呀。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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少吃多滋味，保持微笑
2楼2012-10-30 21:34:50
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minmin-911

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 小娜-小宇 at 2012-10-30 21:34:50
可以正相色谱分析呀，跑反相受溶剂峰影响分离度明显很低，根本说是分不开的呀。

那如果2-6min之间的那些小峰会不会是我的蛋白峰呢？
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3楼2012-10-31 10:15:02
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小娜-小宇

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

跑个标准品吧。就确定几分出峰了

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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少吃多滋味，保持微笑
4楼2012-10-31 13:29:32
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