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minmin-911铜虫 (小有名气)
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[求助]
HPLC 用C18反相柱鉴定蛋白纯度，蛋白峰与溶剂峰混在一起怎么办？已有1人参与
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用HPLC C18反相柱鉴定纯化蛋白质纯度，如图所示，是不是我的目标蛋白的极性太强，导致与溶剂峰混在一起，出峰太早？28min的峰为流动相的峰。那该怎么解决这个问题呢？菜鸟求救啊！ 图1为空白对照： Tris-HCL 含NaCl 0.12M (pH 7.2) 图2为样品溶于Tris-HCL 含NaCl 0.12M (pH 7.2) HPLC柱子：C18, 4.6 mm × 250 mm, 300 A 洗脱液： Solvent A，1%乙酸水溶液 Solvent B，100%甲醇 洗脱条件： 0-10min 10%-30% B 10-20min 30%-70% B 20-40min 70% B 流速为 1.0 ml/min 检测波长为：280 nm 目标蛋白分子量为25KDa, pI为5左右。  图1 对照.jpg  图2 样品.jpg |
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