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22.0kD-3.3kD小分子marker跑Tricine胶，7.8,5.8和3.3的条带出不来，帮忙分析一下吧
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问题如帖子标题所说，请大家帮忙解决下~先谢过了 图片大 只好附件了 请不要嫌麻烦，相互学习嘛~ 图1 S是样品；M是80、60、40、30、20、12kD的marker；m是solarbio的超低分子量蛋白marker，箭头从上到下分别是22.0、14.4kD两条带，最后的三条7.8、5.8和3.3kD的就没有出来，仅有第三个箭头部分模糊的一片。m使用前按照说明书加热处理。图2 在跑的过程中照的，开跑没多久m就开始挤占它两边loading buffer的泳道。图3 是06年nature上的那张图，我不要求那么清晰的，只要后边三条带全分开就好，起码能发挥点儿marker应有的作用。 1.胶浓度原因？这张用的12.5%tricine胶，16%Urea，20%urea的也跑过了，都是m下面的三个低分子的跑不出来。 2.上样量不够？曾经考虑上样量的问题，觉得8μL，10μL可能不够，后来用了16μL，对于marker来说相当大了，图左边的M也就用了4μL。（这个15T的蛋白marker建议分装10μL） 3. 跑胶时间长，小肽出去了？溴酚蓝留了3cm没让出去，后来为了排除这个原因，separating gel时间也是比往常少1-2h，跑胶过程中的温度控制没问题,可是情况未改变。 |
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