24小时热门版块排行榜    

查看: 1319  |  回复: 7
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

幸福gh

新虫 (初入文坛)

[求助] 求高手帮忙看看我的DGGE为什么每次跑出来都是两条深深的条带啊

我做土壤总DNA多样性分析
DNA用试剂盒提的没什么问题
巢氏PCR
引物用细菌通用引物8F\1492R      R518\GC338F
1P和2P结果呈上

DGGE 我试了6%、8%、10%的胶,梯度试了40%-60%、30%-50%
电泳时间100V 9h、80V 12h等等,就是常说的乘积差不多是1000
银染
不管什么条件下都是只有两条深深的带,前段有两条淡一点的带。。胶浓度低一点两条带就离得远一些,高一点就近一点。。实质上无任何进展。。

上传的图片是前面做的胶歪的很,最近把灌胶速度调到超级慢。。一点也不歪了。
手机拍的。。条件艰苦。。求高手指点啊。。

是我PCR产物的问题还是什么呢?呜呜呜。。。

1P.jpg



2P.jpg



5LH_)8CEU~BQALE_R)0)MEY.jpg
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

幸福gh

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by elbo at 2012-11-04 12:25:49
再给你个建议,前2个和后2个孔不要点样,容易跑歪。

这是今天做的图。。
6%胶  30-50%变性梯度
左边是DS2000
接着的6条是我换的新引物。。。最下面貌似也是有条带的
空格一个
3条原来的巢氏PCR
3条用您的建议直接用DNA作的PCR。

现在我又迷茫了。。明显的上面有一些细细的条带。。可是下面的条带算什么呢??呜呜。。求大侠帮忙。。

00.jpg

7楼2012-11-14 01:40:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

幸福gh

新虫 (初入文坛)

呜呜。。高手来帮帮忙。。
2楼2012-10-29 16:30:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

幸福gh

新虫 (初入文坛)

为什么没有人理我呢。。高手们你们都去哪里了?
3楼2012-10-31 12:14:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

elbo

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-11-14 16:25:15
为什么不试试直接用GC夹子引物进行PCR呢。8%胶就可以了,另外灌胶可能有问题吧,最好上传BIORAD的看胶结果。V.H=1230这个许多人采用,而且在正式跑之前都用70V跑半个小时,之后采用100V,120V,80V等等跑,60摄氏度。
4楼2012-10-31 16:54:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +37 医学老男孩 2026-08-13 86/4300 2026-08-18 00:18 by longsantaizi
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +6 angus9576 2026-08-17 11/550 2026-08-17 23:57 by angus9576
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +8 wangze12014 2026-08-14 10/500 2026-08-17 17:05 by xter9665
[基金申请] 时间戳变了,能看出什么问题? +4 基诺咪客 2026-08-17 4/200 2026-08-17 16:10 by Vivilian
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜? +12 Ldrop2023 2026-08-13 15/750 2026-08-17 15:02 by 小豌豆_发芽
[基金申请] 今天系统多次维护,明天很可能放榜! +8 zju2000 2026-08-16 9/450 2026-08-17 12:20 by lmz0216
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +13 archvillain 2026-08-15 25/1250 2026-08-16 20:13 by zhaosm1982
[基金申请] 2027广东省杰青 +3 奶牛小黑 2026-08-15 6/300 2026-08-16 20:07 by 奶牛小黑
[基金申请] 快农历七夕节了,轻松一下,男人悄悄话,女施主请不要进来。 +3 Tide man 2026-08-14 3/150 2026-08-16 17:47 by jurkat.1640
[精细化工] 招聘 金属平磨液,抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] 各位道友,我要去昆明玩几天,回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果? +4 yuleib84 2026-08-11 4/200 2026-08-14 23:05 by lfy8008
[硕博家园] 读博的好处 +4 lnee 2026-08-11 4/200 2026-08-14 10:20 by ahsoarli
[基金申请] 重要来源:本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] Filecode 又变了,巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 分享一下我之前已中青C的计划书的filecode +4 布布和一二 2026-08-11 5/250 2026-08-13 12:56 by cratir
[基金申请] 结合人工智能,周易传统文化,filecode打分制来了,3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见,大家看看几个A,几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] 什么时候出结果,有咨询渠道??? +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
信息提示
请填处理意见