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幸福gh

新虫 (初入文坛)

[求助] 求高手帮忙看看我的DGGE为什么每次跑出来都是两条深深的条带啊

我做土壤总DNA多样性分析
DNA用试剂盒提的没什么问题
巢氏PCR
引物用细菌通用引物8F\1492R      R518\GC338F
1P和2P结果呈上

DGGE 我试了6%、8%、10%的胶,梯度试了40%-60%、30%-50%
电泳时间100V 9h、80V 12h等等,就是常说的乘积差不多是1000
银染
不管什么条件下都是只有两条深深的带,前段有两条淡一点的带。。胶浓度低一点两条带就离得远一些,高一点就近一点。。实质上无任何进展。。

上传的图片是前面做的胶歪的很,最近把灌胶速度调到超级慢。。一点也不歪了。
手机拍的。。条件艰苦。。求高手指点啊。。

是我PCR产物的问题还是什么呢?呜呜呜。。。

1P.jpg



2P.jpg



5LH_)8CEU~BQALE_R)0)MEY.jpg
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elbo

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

再给你个建议,前2个和后2个孔不要点样,容易跑歪。
6楼2012-11-04 12:25:49
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查看全部 8 个回答

幸福gh

新虫 (初入文坛)

呜呜。。高手来帮帮忙。。
2楼2012-10-29 16:30:53
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幸福gh

新虫 (初入文坛)

为什么没有人理我呢。。高手们你们都去哪里了?
3楼2012-10-31 12:14:02
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elbo

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-11-14 16:25:15
为什么不试试直接用GC夹子引物进行PCR呢。8%胶就可以了,另外灌胶可能有问题吧,最好上传BIORAD的看胶结果。V.H=1230这个许多人采用,而且在正式跑之前都用70V跑半个小时,之后采用100V,120V,80V等等跑,60摄氏度。
4楼2012-10-31 16:54:17
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