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如何测定酶促反应的初速率
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如何测定酶促反应的初速率。 这是一道考研真题里的，他要求测定Km,Vmax和V0，前两者我会用双倒数作图法就行，但V0，我想是不是就是测酶活力啊，而且书上说，酶促反应的初速率就是底物浓度变化在5%范围内时曲线的斜率，但是具体怎么控制不太清楚，希望师哥师姐帮忙解答一下 |
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【答案】应助回帖
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hello青果: 金币+8, ★★★★★最佳答案 2012-10-30 12:42:43
hello青果: 金币+8, ★★★★★最佳答案 2012-10-30 12:42:43
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你要测Km,Vmax就要测定一定的酶浓度下不同底物时的初速度，底物浓度的变化范围可以从1/10km到10km,在这个范围内取几个点比如c1,c2,c3,c4，分别测定这几个底物浓度下的初速度v1,v2,v3,v4，根据米氏方程v=Vmax ×S/（Km+S）就能得到Km,Vmax，很简单的。难的是刚开始的时候你并不知道多少底物能使这一定量的酶饱和，因此你要做个试验，配几个底物梯度，比如1m/l 2m/l 3m/l 4m/l，比如它们的初速度分别为 0.1m/l.min，0.3m/l.min，0.5m/l.min，0.5m/l.min，我们可以看出后面两个底物浓度下的初速度是一样的，即酶在这两个底物浓度下已经饱和，我们就是通过这种方式来找出饱和底物浓度的，在饱和底物浓度下的初速度就是Vmax。还有一个问题也很关键，就是如何知道你测的速度是初速度，如果能实时监测的话那就很容易了，你可以得到一个产物浓度随时间变化的曲线，实时监测需要你知道产物在多少波长下有吸收峰，并且吸收值与浓度有线性关系；如果不能实时监测，我们是用HPLC来测产物浓度，隔一段时间取一次样，还要弄清楚你的酶促反应是什么时间尺度来计量，是秒，分钟还是小时，这都需要通过实验来确定，像我们用的酶要用小时做时间尺度，我们是在反应2h后取样用H[LC测产物浓度来计算反应的初速度。 你说的“在底物浓度变化5%范围内求斜率”，这得出的是某一底物浓度下的初速度，底物和产物的浓度都要测，只做这一个曲线是得不到Km,Vmax的 |
4楼2012-10-29 19:25:26
2楼2012-10-29 08:20:56
3楼2012-10-29 12:52:59
5楼2012-10-30 12:43:36
