| 查看: 2938 | 回复: 6 | ||
[求助]
如何测定酶促反应的初速率
|
|
如何测定酶促反应的初速率。 这是一道考研真题里的，他要求测定Km,Vmax和V0，前两者我会用双倒数作图法就行，但V0，我想是不是就是测酶活力啊，而且书上说，酶促反应的初速率就是底物浓度变化在5%范围内时曲线的斜率，但是具体怎么控制不太清楚，希望师哥师姐帮忙解答一下 |
回复此楼» 猜你喜欢
体制内长辈说体制内绝大部分一辈子在底层，如同你们一样大部分普通教师忙且收入低
已经有13人回复
-
售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急
已经有7人回复
-
售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急
已经有8人回复
-
售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急
已经有8人回复
-
售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急
已经有11人回复
-
为什么中国大学工科教授们水了那么多所谓的顶会顶刊，但还是做不出宇树机器人？
已经有8人回复
-
售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急
已经有5人回复
-
售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急
已经有6人回复
-
售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急
已经有9人回复
-
售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急
已经有4人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 有谁用过美国在线腐蚀速率测定仪
已经有12人回复
- E.coli 生长速率测定
已经有3人回复
- 大肠杆菌比生长速率的测定方法
已经有7人回复
- 关于LI6400如何用于测量番茄叶片光合作用速率
已经有17人回复
- U盘速度测试利器，测测你的U盘存取速度吧！！
已经有17人回复
- 离心机速度检测器坏了，求助
已经有3人回复
- 固体培养基培养霉菌的比生长速率怎么测定
已经有15人回复
- 【求助】哪位大虾知道怎么测试污泥的耗氧速率OUR，需要专用的测试仪器么？？
已经有5人回复
2楼2012-10-29 08:20:56
3楼2012-10-29 12:52:59
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
hello青果: 金币+8, ★★★★★最佳答案 2012-10-30 12:42:43
hello青果: 金币+8, ★★★★★最佳答案 2012-10-30 12:42:43
|
你要测Km,Vmax就要测定一定的酶浓度下不同底物时的初速度，底物浓度的变化范围可以从1/10km到10km,在这个范围内取几个点比如c1,c2,c3,c4，分别测定这几个底物浓度下的初速度v1,v2,v3,v4，根据米氏方程v=Vmax ×S/（Km+S）就能得到Km,Vmax，很简单的。难的是刚开始的时候你并不知道多少底物能使这一定量的酶饱和，因此你要做个试验，配几个底物梯度，比如1m/l 2m/l 3m/l 4m/l，比如它们的初速度分别为 0.1m/l.min，0.3m/l.min，0.5m/l.min，0.5m/l.min，我们可以看出后面两个底物浓度下的初速度是一样的，即酶在这两个底物浓度下已经饱和，我们就是通过这种方式来找出饱和底物浓度的，在饱和底物浓度下的初速度就是Vmax。还有一个问题也很关键，就是如何知道你测的速度是初速度，如果能实时监测的话那就很容易了，你可以得到一个产物浓度随时间变化的曲线，实时监测需要你知道产物在多少波长下有吸收峰，并且吸收值与浓度有线性关系；如果不能实时监测，我们是用HPLC来测产物浓度，隔一段时间取一次样，还要弄清楚你的酶促反应是什么时间尺度来计量，是秒，分钟还是小时，这都需要通过实验来确定，像我们用的酶要用小时做时间尺度，我们是在反应2h后取样用H[LC测产物浓度来计算反应的初速度。 你说的“在底物浓度变化5%范围内求斜率”，这得出的是某一底物浓度下的初速度，底物和产物的浓度都要测，只做这一个曲线是得不到Km,Vmax的 |
4楼2012-10-29 19:25:26
5楼2012-10-30 12:43:36
923158905
铜虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1374.6
- 红花: 1
- 帖子: 98
- 在线: 64.4小时
- 虫号: 2518924
- 注册: 2013-06-23
- 专业: 生物化工与食品化工
6楼2016-01-13 22:00:51
7楼2018-04-15 14:11:33
