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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 各位加A尾后还做胶回收或者乙醇沉淀麽？还是直接连接载体.
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Marado

金虫 (正式写手)

Dreamer

[求助] 各位加A尾后还做胶回收或者乙醇沉淀麽？还是直接连接载体.

如题，pfu PCR后72℃，taq酶加A尾，想问一下，你们加完后做不做胶回收的，还是用乙醇沉淀的，考虑到再一次回收浓度可能太低了，所以问一下各位.
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Look,ifyouhadoneshot,oroneopportunity,toseizeeverythingyoueverwanted,inonemoment.Wouldyoucaptureit,orjustletitslip?
1楼 2012-10-26 08:31:23
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trizol11

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我以前做的时候，PCR后没有回收，做这个只是确定一下我的目的基因。不知对你有没有用，
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任重道远……
2楼2012-10-26 08:50:27
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wu_shiyong

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
看你是打算做什么用！不回收也可以，回收下更好！浓度低没事只要有、纯就可以！
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低调稳重务实内敛---------------残
3楼2012-10-26 09:23:30
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Marado

金虫 (正式写手)

Dreamer
引用回帖:
3楼: Originally posted by wu_shiyong at 2012-10-26 09:23:30
看你是打算做什么用！不回收也可以，回收下更好！浓度低没事只要有、纯就可以！

为了连接19t做TA克隆测序
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Look,ifyouhadoneshot,oroneopportunity,toseizeeverythingyoueverwanted,inonemoment.Wouldyoucaptureit,orjustletitslip?
4楼2012-10-26 09:28:42
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dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
Marado: 金币+3, ★★★很有帮助 2012-10-26 09:55:41
回收下比较好，这样你的insert比较纯,不用担心回收后浓度，只要不是低的过分了都是可以使用的。
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5楼2012-10-26 09:42:28
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Marado

金虫 (正式写手)

Dreamer
引用回帖:
5楼: Originally posted by dshlove at 2012-10-26 09:42:28
回收下比较好，这样你的insert比较纯,不用担心回收后浓度，只要不是低的过分了都是可以使用的。

3Q，我也准备用乙醇沉淀法回收一下，胶回收损失有些高，吃不消……
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Look,ifyouhadoneshot,oroneopportunity,toseizeeverythingyoueverwanted,inonemoment.Wouldyoucaptureit,orjustletitslip?
6楼2012-10-26 09:55:26
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dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by Marado at 2012-10-26 09:55:26
3Q，我也准备用乙醇沉淀法回收一下，胶回收损失有些高，吃不消……...

可以，如果假阳性太多，就试试回收后连接哈。
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7楼2012-10-26 10:05:54
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aloon111

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
做PCR 8小管，然后点一个大孔，回收，这样浓度够你用的。
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汇天下之贤
8楼2012-10-26 10:28:33
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wu_shiyong

银虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by Marado at 2012-10-26 09:28:42
为了连接19t做TA克隆测序...

条带单一可以直接连！
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低调稳重务实内敛---------------残
9楼2012-10-26 12:48:22
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太极拳

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
加A后可以直接连T载体的。如果不保险可以酒精沉淀一下
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10楼2012-10-26 15:01:56
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