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Marado

金虫 (正式写手)

Dreamer

[求助] 各位加A尾后还做胶回收或者乙醇沉淀麽?还是直接连接载体.

如题,pfu PCR后72℃,taq酶加A尾,想问一下,你们加完后做不做胶回收的,还是用乙醇沉淀的,考虑到再一次回收浓度可能太低了,所以问一下各位.
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Look,ifyouhadoneshot,oroneopportunity,toseizeeverythingyoueverwanted,inonemoment.Wouldyoucaptureit,orjustletitslip?
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trizol11

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我以前做的时候,PCR后没有回收,做这个只是确定一下我的目的基因。不知对你有没有用,
任重道远……
2楼2012-10-26 08:50:27
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wu_shiyong

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
看你是打算做什么用!不回收也可以,回收下更好!浓度低没事只要有、纯就可以!
低调稳重务实内敛---------------残
3楼2012-10-26 09:23:30
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Marado

金虫 (正式写手)

Dreamer

引用回帖:
3楼: Originally posted by wu_shiyong at 2012-10-26 09:23:30
看你是打算做什么用!不回收也可以,回收下更好!浓度低没事只要有、纯就可以!

为了连接19t做TA克隆测序
Look,ifyouhadoneshot,oroneopportunity,toseizeeverythingyoueverwanted,inonemoment.Wouldyoucaptureit,orjustletitslip?
4楼2012-10-26 09:28:42
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dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
Marado: 金币+3, ★★★很有帮助 2012-10-26 09:55:41
回收下比较好,这样你的insert比较纯,不用担心回收后浓度,只要不是低的过分了都是可以使用的。
5楼2012-10-26 09:42:28
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Marado

金虫 (正式写手)

Dreamer

引用回帖:
5楼: Originally posted by dshlove at 2012-10-26 09:42:28
回收下比较好,这样你的insert比较纯,不用担心回收后浓度,只要不是低的过分了都是可以使用的。

3Q,我也准备用乙醇沉淀法回收一下,胶回收损失有些高,吃不消……
Look,ifyouhadoneshot,oroneopportunity,toseizeeverythingyoueverwanted,inonemoment.Wouldyoucaptureit,orjustletitslip?
6楼2012-10-26 09:55:26
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dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by Marado at 2012-10-26 09:55:26
3Q,我也准备用乙醇沉淀法回收一下,胶回收损失有些高,吃不消……...

可以,如果假阳性太多,就试试回收后连接哈。
7楼2012-10-26 10:05:54
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aloon111

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
做PCR 8小管,然后点一个大孔,回收,这样浓度够你用的。
汇天下之贤
8楼2012-10-26 10:28:33
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wu_shiyong

银虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by Marado at 2012-10-26 09:28:42
为了连接19t做TA克隆测序...

条带单一可以直接连!
低调稳重务实内敛---------------残
9楼2012-10-26 12:48:22
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太极拳

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
加A后可以直接连T载体的。如果不保险可以酒精沉淀一下
10楼2012-10-26 15:01:56
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