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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 亲和层析
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tuming0302

新虫 (初入文坛)

[求助] 亲和层析

请问各位大神，有没有通过亲和层析的方法来筛选结合蛋白的？我目前想通过亲和层析的方法来筛选一个小分子药物的结合蛋白，但是对于选择亲和基质以及柱子的选择还有一些不明白，所以想请各位大神指点一二。万分感谢。

[ 来自科研家族 生物医药家族 ]
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1楼 2012-10-25 19:38:26
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xj0311

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
首先选择载体，现在一般用聚丙烯酰胺凝胶，柱子选择应该与你的蛋白吸附性强的，然后选择合适的洗脱液就可以洗脱下来，
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2楼2012-10-26 08:37:58
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dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-10-26 13:43:19
亲和是靠的生物性识别或者配基特异性，蛋白上要有标签，柱子上要有与标签结合的特异性配基，这样有标签的蛋白结合，没标签的流穿。然后再将挂上的蛋白洗脱，达到富集的目的。
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3楼2012-10-26 09:58:13
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tuming0302

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by dshlove at 2012-10-26 09:58:13
亲和是靠的生物性识别或者配基特异性，蛋白上要有标签，柱子上要有与标签结合的特异性配基，这样有标签的蛋白结合，没标签的流穿。然后再将挂上的蛋白洗脱，达到富集的目的。

谢谢，但是我现在需要做的是筛选一个小分子化合物的结合蛋白，利用亲和层析方法来筛选，我在文献上看到Toyoperal类树脂跟琼脂糖相比，能更好的用于亲和层析，不知道您对这方面了不了解？可不可以给我一些指点？万分感谢。
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4楼2012-10-26 12:45:41
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tuming0302

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by xj0311 at 2012-10-26 08:37:58
首先选择载体，现在一般用聚丙烯酰胺凝胶，柱子选择应该与你的蛋白吸附性强的，然后选择合适的洗脱液就可以洗脱下来，

谢谢。。。
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5楼2012-10-26 12:46:24
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dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
小丹木木: 金币+1, 鼓励 2012-10-26 13:43:39
引用回帖:
4楼: Originally posted by tuming0302 at 2012-10-26 12:45:41
谢谢，但是我现在需要做的是筛选一个小分子化合物的结合蛋白，利用亲和层析方法来筛选，我在文献上看到Toyoperal类树脂跟琼脂糖相比，能更好的用于亲和层析，不知道您对这方面了不了解？可不可以给我一些指点？万分 ...

Toyoperal类树脂我没用过，但是我觉得既然是亲和的，原理差不多是一样的。
其实就我了解亲和层析和树脂关系不是很大，要看你的蛋白怎么和树脂结合倒是个值得去想的问题。
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6楼2012-10-26 12:54:09
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tuming0302

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by dshlove at 2012-10-26 12:54:09
Toyoperal类树脂我没用过，但是我觉得既然是亲和的，原理差不多是一样的。
其实就我了解亲和层析和树脂关系不是很大，要看你的蛋白怎么和树脂结合倒是个值得去想的问题。...

谢谢你。这个树脂主要是作为固相载体来偶联药物，然后筛选药物结合蛋白。目前考虑的是药物的特性对偶联及结合蛋白的筛选的影响。不知道你做没做过连续亲和层析，就是不同于传统的竞争方法。谢谢。
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7楼2012-10-26 13:38:49
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dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-10-27 15:47:25
引用回帖:
7楼: Originally posted by tuming0302 at 2012-10-26 13:38:49
谢谢你。这个树脂主要是作为固相载体来偶联药物，然后筛选药物结合蛋白。目前考虑的是药物的特性对偶联及结合蛋白的筛选的影响。不知道你做没做过连续亲和层析，就是不同于传统的竞争方法。谢谢。...

你的是固相载体，你担心的是药物特性对结合后蛋白分离的影响。
我不清楚你的药物，一般无亲和力或非特异吸附的物质则被起始缓冲液洗涤出来，并形成了第一个层析峰；然后，恰当地改变起始缓冲液的pH值、或增加离子强度、或加入抑制剂等因子，即可把物质S从固相载体上解离下来，并形成了第二个层析峰，但是条件还是要靠你自己去试。
希望有帮助。
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tuming0302
8楼2012-10-26 14:03:55
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tuming0302

新虫 (初入文坛)
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9楼2012-10-26 15:13:22
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dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

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10楼2012-10-26 15:47:37
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