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tuming0302

新虫 (初入文坛)

[求助] 亲和层析

请问各位大神,有没有通过亲和层析的方法来筛选结合蛋白的?我目前想通过亲和层析的方法来筛选一个小分子药物的结合蛋白,但是对于选择亲和基质以及柱子的选择还有一些不明白,所以想请各位大神指点一二。万分感谢。

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xj0311

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
首先选择载体,现在一般用聚丙烯酰胺凝胶,柱子选择应该与你的蛋白吸附性强的,然后选择合适的洗脱液就可以洗脱下来,
2楼2012-10-26 08:37:58
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dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-10-26 13:43:19
亲和是靠的生物性识别或者配基特异性,蛋白上要有标签,柱子上要有与标签结合的特异性配基,这样有标签的蛋白结合,没标签的流穿。然后再将挂上的蛋白洗脱,达到富集的目的。
3楼2012-10-26 09:58:13
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tuming0302

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by dshlove at 2012-10-26 09:58:13
亲和是靠的生物性识别或者配基特异性,蛋白上要有标签,柱子上要有与标签结合的特异性配基,这样有标签的蛋白结合,没标签的流穿。然后再将挂上的蛋白洗脱,达到富集的目的。

谢谢,但是我现在需要做的是筛选一个小分子化合物的结合蛋白,利用亲和层析方法来筛选,我在文献上看到Toyoperal类树脂跟琼脂糖相比,能更好的用于亲和层析,不知道您对这方面了不了解?可不可以给我一些指点?万分感谢。
4楼2012-10-26 12:45:41
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tuming0302

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by xj0311 at 2012-10-26 08:37:58
首先选择载体,现在一般用聚丙烯酰胺凝胶,柱子选择应该与你的蛋白吸附性强的,然后选择合适的洗脱液就可以洗脱下来,

谢谢。。。
5楼2012-10-26 12:46:24
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dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


小丹木木: 金币+1, 鼓励 2012-10-26 13:43:39
引用回帖:
4楼: Originally posted by tuming0302 at 2012-10-26 12:45:41
谢谢,但是我现在需要做的是筛选一个小分子化合物的结合蛋白,利用亲和层析方法来筛选,我在文献上看到Toyoperal类树脂跟琼脂糖相比,能更好的用于亲和层析,不知道您对这方面了不了解?可不可以给我一些指点?万分 ...

Toyoperal类树脂我没用过,但是我觉得既然是亲和的,原理差不多是一样的。
其实就我了解亲和层析和树脂关系不是很大,要看你的蛋白怎么和树脂结合倒是个值得去想的问题。
6楼2012-10-26 12:54:09
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tuming0302

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by dshlove at 2012-10-26 12:54:09
Toyoperal类树脂我没用过,但是我觉得既然是亲和的,原理差不多是一样的。
其实就我了解亲和层析和树脂关系不是很大,要看你的蛋白怎么和树脂结合倒是个值得去想的问题。...

谢谢你。这个树脂主要是作为固相载体来偶联药物,然后筛选药物结合蛋白。目前考虑的是药物的特性对偶联及结合蛋白的筛选的影响。不知道你做没做过连续亲和层析,就是不同于传统的竞争方法。谢谢。
7楼2012-10-26 13:38:49
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dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-10-27 15:47:25
引用回帖:
7楼: Originally posted by tuming0302 at 2012-10-26 13:38:49
谢谢你。这个树脂主要是作为固相载体来偶联药物,然后筛选药物结合蛋白。目前考虑的是药物的特性对偶联及结合蛋白的筛选的影响。不知道你做没做过连续亲和层析,就是不同于传统的竞争方法。谢谢。...

你的是固相载体,你担心的是药物特性对结合后蛋白分离的影响。
我不清楚你的药物,一般无亲和力或非特异吸附的物质则被起始缓冲液洗涤出来,并形成了第一个层析峰;然后,恰当地改变起始缓冲液的pH值、或增加离子强度、或加入抑制剂等因子,即可把物质S从固相载体上解离下来,并形成了第二个层析峰,但是条件还是要靠你自己去试。
希望有帮助。

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8楼2012-10-26 14:03:55
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tuming0302

新虫 (初入文坛)

送鲜花一朵
内容已删除
9楼2012-10-26 15:13:22
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dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

内容已删除
10楼2012-10-26 15:47:37
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