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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 革兰氏染色脱色
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lhfllhhff

铜虫 (初入文坛)

[求助] 革兰氏染色脱色

请教个问题，革兰氏染色95%乙醇可以用无水乙醇代替吗？还有我做出来的大肠杆菌一直都是紫色，明明初染和媒染的时候我都已经都缩短到30s了，但是脱色还是不能把紫色完全脱去，结晶紫和碘液都是按照书上新配的，应该没有什么问题，我用无水乙醇脱色都脱了差不多1分钟，但是还是有紫色，求解啊
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1楼 2012-10-25 17:13:21
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爱老虎油920

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
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rainwander: 金币+1, 鼓励交流 2012-10-26 20:28:00
可能是你的菌种染菌了，里面混有别的杂菌（阳性菌）。也可能是你玻片上涂得的 不够均匀，不够开，好几层菌重叠在一起了，脱色只能脱去表层！
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13楼2012-10-26 18:13:09
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匿名

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2楼2012-10-25 17:39:35
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w1y2l3

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
scelab: 金币+3, 谢谢热心交流~ :) 2012-10-27 10:04:42
lhfllhhff: 金币+3, ★★★很有帮助, 谢谢指点 2012-10-27 11:56:31
草酸铵起提供弱碱性环境作用，有的配方中第一液直接是结晶紫水溶液，染色第一步是将碳酸氢钠水溶液与结晶紫水溶液相混，效果与传统方法相当，也有人在碘液中加入氢氧化钾或钠------称碱性碘液
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16楼2012-10-26 21:13:05
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lhfllhhff

铜虫 (初入文坛)
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2楼: Originally posted by shangyukuan at 2012-10-25 17:39:35
弱弱的问一句楼主能确定的地方一定经过了“无水乙醇脱色都脱了差不多1分钟”这一步吗？在操作无误的情况下，革兰氏染色的结果无外乎4种：阳性、阴性、不着色、着色不定（或为阴性或为阳性），不过大肠杆菌这种的，经 ...

是的，我用塑料滴管吸取无水乙醇然后一滴滴的滴在上面脱色，大约用满满的滴管滴了6--8管，脱色完以后用肉眼看还是看到载玻片上大肠杆菌那一块还是有紫色的，显微镜下也是淡淡的紫色····初染和媒染我都只染了30s的····
弱弱再问一句，番红染出来的颜色是大红色？深红色？还是紫红色的？
感谢解答
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3楼2012-10-25 23:02:23
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匿名

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4楼2012-10-25 23:47:01
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lhfllhhff

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by shangyukuan at 2012-10-25 23:47:01
我没用过番红，那时用的是品红，光线较强时看着介于红和粉红之间吧，你不确定，可以用番红做个简单染色看一下呀...

做了，颜色有点偏紫，不知道不是不放的时间久了，放了2年了····品红可以代替番红吗？可以说说怎么配的吗？感谢~
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5楼2012-10-26 00:36:25
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匿名

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rainwander: 金币+1, 鼓励交流 2012-10-26 20:28:32
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6楼2012-10-26 08:46:04
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冀京枭

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

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同学，番红是最后一步啊···关键是前面脱色后怎么会是紫色呢？是结晶紫出问题了吧，我以前做的时候，脱色二十秒就够了·······你看下是不是结晶紫的问题，不过我以前有一次是番红出问题了，染得无论阳性阴性都成了红色····
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贞而不谅
7楼2012-10-26 10:11:40
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lhfllhhff

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by shangyukuan at 2012-10-26 08:46:04
你自己查查吧，不是说“品红可以代替番红”这两个应该都是染料吧，革兰氏染色就是用两种颜色不同的染料对菌体进行染色，通过染色结果的不同来宏观上只是其细胞壁的结构，这个么就好比说酵母菌吧，细胞壁分为三层， ...

好，今天重新买番红重新配，再看看效果如何。另外问一句，您做过芽孢染色吗？做芽孢杆菌的芽孢染色一般是要斜面培养多长时间？
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8楼2012-10-26 10:17:12
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lhfllhhff

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 冀京枭 at 2012-10-26 10:11:40
同学，番红是最后一步啊···关键是前面脱色后怎么会是紫色呢？是结晶紫出问题了吧，我以前做的时候，脱色二十秒就够了·······你看下是不是结晶紫的问题，不过我以前有一次是番红出问题了，染得无论阳性阴性 ...

我也怀疑是不是结晶紫的问题，但是我借其他实验室的结晶紫好像也这样脱色不完全···
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9楼2012-10-26 10:19:26
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匿名

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10楼2012-10-26 10:27:58
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