24小时热门版块排行榜

返回列表

hopebiolqdhb

金虫 (著名写手)

MicEPI: 1
应助: 1 (幼儿园)
金币: 4136.8
散金: 10
红花: 8
帖子: 1641
在线: 270.5小时
虫号: 1027227
注册: 2010-05-24
专业: 食品卫生

[交流] 微生物实验常用染色液及染色方法已有8人参与

　2　染色液配制及染色法
　　2.1　美蓝染色法
　　2.1.1　吕氏碱性美蓝染色液
　　美蓝　　　　　　　　　　　0.3g
　　95%乙醇　　　　　　　　　 30mL
　　0.01%氢氧化钾溶液　　　　100mL
　　将美蓝溶解于乙醇中，然后与氢氧化钾溶液混合。
　　2.1.2　染色法
　　将涂片在火焰上固定，待冷。滴加染液，染1～3min，水洗，待干，镜检。
　　2.1.3　结果
　　菌体呈蓝色。
　　2.2　革兰氏染色法
　　2.2.1　结晶紫染色液
　　结晶紫　　　　　　　　1g
　　95%乙醇　　　　　　　 20mL
　　1%草酸铵水溶液　　　　80mL
　　将结晶紫溶解于乙醇中，然后与草酸铵溶液混合。
　　2.2.2　革兰氏碘液
　　碘　　　　　　　　　　1g
　　碘化钾　　　　　　　　2g
　　蒸馏水　　　　　　　　300mL
　　将碘与碘化钾先进行混合，加入蒸馏水少许，充分振摇，待完全溶解后，再加蒸馏水至300mL。
　　2.2.3　沙黄复染液
　　沙黄　　　　　　　　　 0.25g
　　95%乙醇　　　　　　　　10mL
　　蒸馏水　　　　　　　　 90mL
　　将沙黄溶解于乙醇中，然后用蒸馏水稀释。
　　2.2.4　染色法
　　2.2.4.1　将涂片在火焰上固定，滴加结晶紫染色液，染1min，水洗。
　　2.2.4.2　滴加革兰氏碘液，作用1min，水洗。
　　2.2.4.3　滴加95%乙醇脱色，约30s；或将乙醇滴满整个涂片，立即倾去，再用乙醇滴满整个涂片，脱色10s。
　　2.2.4.4　水洗，滴加复染液，复染1min。水洗，待干，镜检。
　　2.2.5　结果
　　革兰氏阳性菌呈紫色。革兰氏阴性菌呈红色。
　　注：亦可用1：10稀释石炭酸复红染色液作复染液，复染时间仅需10s。
　　2.3　耐酸性染色法(萎－倪二氏法)
　　2.3.1　石炭酸品红染色液
　　碱性品红　　　　　　 0.3g
　　95%乙醇　　　　　　　10mL
　　5%酚水溶液　　　　　 90mL
　　将品红溶解于乙醇中，然后与酚溶液混合。
　　2.3.2　3%盐酸－乙醇
　　浓盐酸　　　　　　　 3mL
　　95%乙醇　　　　　　　97mL
　　2.3.3　复染液
　　吕氏碱性美蓝染色液。
　　2.3.4　染色法
　　2.3.4.1　将涂片在火焰上加热固定，滴加石炭酸品红染色液，徐徐加热至有蒸气出现，但切不可使沸腾。染液如因蒸发减少时，应随时添加。染5min，倾去染液，水洗。
　　2.3.4.2　滴加盐酸－乙醇脱色，直至无红色脱落为止(所需时间视涂片厚薄而定，一般为1～3min)，水洗。
　　2.3.4.3　滴加吕氏碱性美蓝染色液，复染30s～1min，水洗，待干，镜检。
　　2.3.5　结果：耐酸性细菌呈红色，其他细菌、细胞等物质呈蓝色。
　　2.4　柯氏染色法
　　2.4.1　染色液
　　2.4.1.1　0.5%沙黄液。
　　2.4.1.2　0.5%孔雀绿液。
　　2.4.2　染色法
　　2.4.2.1　将涂片在火焰上固定，滴加0.5%沙黄液，并加热至出现气泡，约2～3min，水洗。
　　2.4.2.2　滴加0.5%孔雀绿液，复染40～50s。水洗，待干，镜检。
　　2.4.3　结果
　　布氏杆菌呈红色，其他细菌及细胞呈绿色。
　　2.5　奥尔特氏荚膜染色法
　　2.5.1　染色液
　　沙黄　　　　　　　　　　 3g
　　蒸馏水　　　　　　　　　 100mL
　　用乳钵研磨溶解。
　　2.5.2　染色法
　　将涂片在火焰上固定，滴加染色液，并加热至产生蒸气后，继续染3min。水洗，待干，镜检。
　　2.5.3　结果
　　炭疽芽胞杆菌菌体呈赤褐色，荚膜呈黄色。
　　2.6　瑞氏染色法
　　2.6.1　染色液
　　瑞氏色素　　　　　0.1g
　　甲醇　　　　　　　60mL
　　用乳钵研磨溶解。
　　2.6.2　染色法
　　2.6.2.1　涂片待自然干燥后，滴加染色液，固定1min。
　　2.6.2.2　加入等量蒸馏水(pH6.5)，染色3～5min。
　　2.6.2.3　用蒸馏水冲洗，待干，镜检。
　　2.7　鞭毛染色法
　　2.7.1　染色液的配制
　　2.7.1.1　甲液：称丹宁酸5g、氯化高铁(FeCl3)1.5g，溶于100mL蒸馏水中，待溶解后加入1%的氢氧化钠溶液1mL和15%的甲醛溶液2mL。
　　2.7.1.2　乙液：称2g硝酸银溶于100mL蒸馏水中。
　　在90mL乙液中滴加浓氢氧化铵溶液，到出现沉淀后，再滴加使其变为澄清，然后用其余10mL乙液小心滴加至澄清液中，至出现轻微雾状为止(此为关键性操作，应特别小心)。滴加氢氧化铵和用剩余乙液回滴时，要边滴边充分摇荡，染液当天配，当天使用，2～3d基本无效。
　　2.7.2　染色法
　　在风干的载玻片上滴加甲液，4～6min后，用蒸馏水轻轻冲净。再加乙液，缓缓加热至冒汽，维持约半分钟(加热时注意勿使出现干燥面)。在菌体多的部位可呈深褐色到黑色，停止加热，用水冲净，干后镜检，菌体及鞭毛为深褐色到黑色。
　　2.8　碱性复红染色法
　　将0.5g碱性复红染料溶解于20mL95%乙醇中，然后用蒸馏水稀释至100mL。如有不溶物时，可用滤纸过滤，或静置后取上清液备用。
　　注：本染色液系用于苏云金芽胞内蛋白质毒素结晶的染色，藉以与蜡样芽胞杆菌相区别。

回复此楼