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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 请教各位前辈关于EMSA（gel shift）的问题！
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woshiap

铁虫 (初入文坛)

[求助] 请教各位前辈关于EMSA（gel shift）的问题！ 已有1人参与

我没做过蛋白实验，理论知识也懂的少，书上面的东西自己不敢确定是不是理解的对。所以想各位前辈求教！我准备做EMSA实验，验证C/EBPβ跟我做的基因启动子核心区域的结合。超标达我做了，结果很好。所遇到的问题如下:1.我看有promega的gel shift试剂盒和thermo的EMSA试剂盒，前者便宜一半，但是不知道哪个跟好些？
2.我用在线软件TFsearch在我验证的核心启动子去找到2个C/EBPβ。但是预测的结果显示，2个C/EBPβ 的结合位点的序列不同，这样的话，我合成探针是不是要合成2个，还是合成一个但包含2个2个C/EBPβ不同的结合序列？是不是探针一定要p32标记？标两端吗？
3.我是做猪的基因，抗体的话猪的很少！C/EBPβ只在santa cruz 这家找到一个可以在猪上用的。不知道怎么才能验证这个抗体是否符合要求？
希望各位能为小弟解答迷津！在此谢过！
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1楼 2012-10-23 10:09:22
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woshiap

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by weigh1111 at 2012-10-24 08:59:52
1.我没用过试剂盒，但是这两家的试剂盒应该都还不错吧~
2.最好分成两个合成吧~而且P32标记的时候我们采用的是标记引物然后PCR扩增最后回收的方法，是标记的一头。但是实际上也有人PCR扩增出来之后再用P32标记，这样 ...

谢谢你的回复！抗体是用来定性检测转录因子的！
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4楼2012-10-25 08:53:23
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weigh1111

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助 2012-10-24 13:48:33
1.我没用过试剂盒，但是这两家的试剂盒应该都还不错吧~
2.最好分成两个合成吧~而且P32标记的时候我们采用的是标记引物然后PCR扩增最后回收的方法，是标记的一头。但是实际上也有人PCR扩增出来之后再用P32标记，这样的话就是标记的两头。而且如果你单纯只是看结合不结合的话可以考虑做不用标记的DNA来实验，最后用sybr green或者EB染胶
3.话说你EMSA的话，抗体准备拿来做什么呢？western？
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3楼2012-10-24 08:59:52
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yuxiangrousi

铜虫 (初入文坛)
想问下你的转录因子是怎么找出来的啊？？  我最近也在找 用酵母单杂的方法 但是还没有成功｀｀
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需要多多吸取知识
5楼2012-12-10 13:52:14
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huangqi2016

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by weigh1111 at 2012-10-24 08:59:52
1.我没用过试剂盒，但是这两家的试剂盒应该都还不错吧~
2.最好分成两个合成吧~而且P32标记的时候我们采用的是标记引物然后PCR扩增最后回收的方法，是标记的一头。但是实际上也有人PCR扩增出来之后再用P32标记，这样 ...

你好！请问EB染胶能看到标记上了生物素吗？

发自小木虫IOS客户端
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6楼2016-03-13 11:10:32
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