| 查看: 1939 | 回复: 8 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
huangyan0517金虫 (小有名气)
|
[求助]
sds崩溃了，求解答
|
|
|
我把步骤说的详细些： 溶液都是按分子克隆实验书上配的，30%丙烯酰胺混合液（29:1），1.5mol/，ph8.8的ltris，1mol/l ph6.8tris ，用1mol/l ph6.8tris配的上样buffer，5倍电泳缓冲液（15.1g tris，94g gly，5g sds，1000ml）。 配胶的过程： 用的伯乐mini 1mm电泳版，板洗干净之后夹好，晾干，用的时候直接用 分离胶15%，灌完分离胶，用蒸馏水封闭一下，大概1cm的高度 等大概20-30分钟，倒掉水，滤纸吸干，灌浓缩胶，插梳子，再过半小时拔梳子。 样品浓度比较高，大概17mg/ml，0.01M的PB溶液，之前是用20ul一倍上样buffer混合5ul样品，煮沸1min后上样，上样每孔20ul。 电泳条件为浓缩胶20min，分离胶50分钟。样品为溶菌酶及其多聚体混合物。 图如下，左边两条为自己做的marker，第一个为bsa，第二个为bsa和溶菌酶单体混合物。 目前问题如下： （1）拔完梳子之后，胶孔会有一层薄膜，应该是梳子和板之间不紧密，有空隙产生的，但是梳子是配套的，每次都会有样品加不进去的情况，用针挑也跳不干净，各位有没有这种情况，怎么解决的？ （2）ph8.8和6.8的ph用浓盐酸调好之后，ph还会变化，会增加0.1-0.2的ph，即使调好之后，还是没有压缩效应。 （3）胶配好之后，把板夹到电泳槽上，灌满电泳缓冲液，几乎每次第一次都会漏液，第二次就不会，操作完全一样 (4)电泳缓冲液没调过ph，上次测了一下，1倍大概8.5， （5）样品分子质量越大，拖尾月严重。 （6）0.01m pb离子强度影响很大吗 跪求高人解答 后面两个是跑的血清样品，浓缩胶5%，分离胶10%，其他条件基本和上面一直，手机拍的，不太清楚，拜托也给分析分析。  溶菌酶浓缩液.jpg  1.JPG  2.JPG |
回复此楼» 猜你喜欢
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有138人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
-
氢氧化钾活化操作
已经有18人回复
-
散金
已经有68人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
cicelyzh
铁杆木虫 (职业作家)
- MolEPI: 10
- 应助: 1662 (讲师)
- 金币: 8693.8
- 红花: 72
- 帖子: 3516
- 在线: 456小时
- 虫号: 1614001
- 注册: 2012-02-13
- 专业: 生物化学
7楼2012-10-23 08:22:05
huangyan0517
金虫 (小有名气)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 1517.3
- 散金: 10
- 红花: 2
- 帖子: 100
- 在线: 80.1小时
- 虫号: 1043542
- 注册: 2010-06-18
- 性别: GG
- 专业: 细胞增殖、生长与分化
2楼2012-10-22 10:52:00
longway102
至尊木虫 (文坛精英)
- 应助: 412 (硕士)
- 金币: 11994.5
- 散金: 4296
- 红花: 14
- 帖子: 10918
- 在线: 797.2小时
- 虫号: 508226
- 注册: 2008-02-20
- 专业: 数论
3楼2012-10-22 11:14:25
huangyan0517
金虫 (小有名气)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 1517.3
- 散金: 10
- 红花: 2
- 帖子: 100
- 在线: 80.1小时
- 虫号: 1043542
- 注册: 2010-06-18
- 性别: GG
- 专业: 细胞增殖、生长与分化
4楼2012-10-22 12:03:06
20
