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张玉2008

金虫 (小有名气)

胖胖鱼

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[求助] 为什么我的maker总是不清晰

如题，请高手们指导，
我用的TAKARA公司的DL500 DNA Maker，3%琼脂糖凝胶，Tiandz 耐热型SYBR染料3ul，100V，40min，跑出来的MAKER很不清晰，为什么呢？

maker不清晰.jpg

2.jpg

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一辈子不长，对自己好点

1楼 2012-10-17 22:45:05

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西瓜

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
张玉2008: 金币+3, ★★★很有帮助, 非常感谢 2012-10-21 13:10:29
张玉2008: 金币+3, ★★★很有帮助, 谢谢 2013-01-21 16:06:46

重复煮对琼脂糖本身没什么大影响，但是会影响染料。EB的话，可以重复煮一次胶而不必补加EB。Sybr Green的热稳定性没有EB好，如果重复煮胶，需要等胶凉下来再补加。当然如果你是把染料加到样品里，或者跑完胶之后再浸泡到染料里染色，则不存在这个问题。

条带有波浪型，加上你说凝胶速度很快，那就是胶没有均匀凝固了。我们一般是普通微波炉，中高火，两分钟，然后自然冷却15分钟左右就可以加染料了，0.5%~2%的胶都是这样，没问题。你说的半分钟凝固是夸张了些。。。。。

另外，看条带有点糊，可能是焦距没调好，如果仪器上或者控制软件上有“聚焦”、“散焦”的按钮，那就自己调调看，以条带最清晰、最锐利为宜。