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702287914

铜虫 (小有名气)

[求助] 纤维素酶动力学常数的测定

我要用商业化的液体纤维素酶做不同底物浓度(分别做秸秆和纯纤维素)的酶促反应动力学实验,分别求出其的Km值和Vmax值,我刚接触动力学,请问应该怎样确定底物浓度和纤维素酶浓度,并多少时间取一次样?(使用Lineweaver-Burk双倒数作图法)
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702287914

铜虫 (小有名气)

求助,高手在哪里?
2楼2012-10-16 12:28:21
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yudou_love

木虫 (正式写手)

伪学霸

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
702287914: 金币+2, 有帮助 2012-10-17 10:51:39
只在大学里做过几次动力学实验,用的是测电导率和透过率的方法。每次测量都是20~30s 看一次结果,具体间隔时间看你底物浓度。至于底物浓度和反应物的浓度,自己把握啦,先试着做几次。
其他的再具体的我就不清楚鸟……
伤情最是晚凉天,憔悴斯人不堪怜。邀酒摧肠三杯醉,寻香惊梦五更寒。钗头凤斜卿有泪,荼靡花了我无缘。小楼寂寞心宇月,也难如钩也难圆。
3楼2012-10-16 12:35:58
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702287914

铜虫 (小有名气)

时间那么短啊,我的是放在50℃,160转/min的摇床中反应的
4楼2012-10-16 12:47:01
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virty76

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
702287914: 金币+2, 有帮助 2012-10-17 10:52:03
一般是测酶初速,3-5min,看你以前的测酶活方法定,有的也延长到10或30min
5楼2012-10-16 15:52:29
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702287914

铜虫 (小有名气)

我以前是1h和4h取样
算不同底物浓度的动力学,要设计多少组底物浓度啊
6楼2012-10-16 16:29:45
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响应面

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
702287914: 金币+2, 有帮助 2012-10-17 11:38:47
这要看酶反应时间,以我经验,应该也不长,刚开始可取每隔15min,三小时之后去每隔半小时到一小时,动力学模拟要数据量适中,拟合
数据太少了实际意义不大,另 拟合选用 origin 或 matlab 教方便
天天如此耶!!!
7楼2012-10-17 11:30:18
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