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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 纤维素酶动力学常数的测定
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702287914

铜虫 (小有名气)

[求助] 纤维素酶动力学常数的测定

我要用商业化的液体纤维素酶做不同底物浓度（分别做秸秆和纯纤维素)的酶促反应动力学实验，分别求出其的Km值和Vmax值，我刚接触动力学，请问应该怎样确定底物浓度和纤维素酶浓度，并多少时间取一次样？(使用Lineweaver-Burk双倒数作图法）
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1楼 2012-10-16 12:14:55
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702287914

铜虫 (小有名气)
求助，高手在哪里？
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2楼2012-10-16 12:28:21
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yudou_love

木虫 (正式写手)

伪学霸

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
702287914: 金币+2, ★有帮助 2012-10-17 10:51:39
只在大学里做过几次动力学实验，用的是测电导率和透过率的方法。每次测量都是20~30s 看一次结果，具体间隔时间看你底物浓度。至于底物浓度和反应物的浓度，自己把握啦，先试着做几次。
其他的再具体的我就不清楚鸟……
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伤情最是晚凉天，憔悴斯人不堪怜。邀酒摧肠三杯醉，寻香惊梦五更寒。钗头凤斜卿有泪，荼靡花了我无缘。小楼寂寞心宇月，也难如钩也难圆。
3楼2012-10-16 12:35:58
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702287914

铜虫 (小有名气)
时间那么短啊，我的是放在50℃，160转/min的摇床中反应的
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4楼2012-10-16 12:47:01
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virty76

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
702287914: 金币+2, ★有帮助 2012-10-17 10:52:03
一般是测酶初速，3-5min，看你以前的测酶活方法定，有的也延长到10或30min
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5楼2012-10-16 15:52:29
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702287914

铜虫 (小有名气)
我以前是1h和4h取样
算不同底物浓度的动力学，要设计多少组底物浓度啊
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6楼2012-10-16 16:29:45
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响应面

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
702287914: 金币+2, ★有帮助 2012-10-17 11:38:47
这要看酶反应时间，以我经验，应该也不长，刚开始可取每隔15min，三小时之后去每隔半小时到一小时，动力学模拟要数据量适中，拟合
数据太少了实际意义不大，另 拟合选用 origin 或 matlab 教方便
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天天如此耶！！！
7楼2012-10-17 11:30:18
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