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点点tina

金虫 (小有名气)

[求助] 硫酸苯酚法测定多糖含量中量的问题

我做的标准曲线是比较好的,R2在0.99以上。我做多糖的提取之后算出来的多糖的含量极其少,在0.14mg/ml以下,可是它应该的范围是在4mg/ml左右,我想知道是否是硫酸苯酚法的问题呢?还是怎样呢?
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努力分离,好好解谱
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xiaozhe026

新虫 (初入文坛)


karl2100: 金币+1, 谢谢参与讨论! 2013-07-20 15:18:59
引用回帖:
12楼: Originally posted by guoheizi at 2012-10-17 20:44:26
savage 除的蛋白。。。妹纸 你不把有机相除去 我很难想象你是怎么把糖拿到的。。。乙醇和参合了正丁醇的混合物不会互溶么?你多少的醇沉?50?还是70?你的产率多大?
至于烘干这个办法我没试过 但是据我们实验室的 ...

请问一下,这个含量计算方法是怎样的呢?个人有点不太懂。先用葡萄糖作出标曲,以木瓜多样为例:精确称取野木瓜粉末0.2g,用80%乙醉浸泡过夜,索氏抽提器中用80%乙醉回流3h,以去除单搪、低聚糖、普类及生物碱等成分。残渣挥干乙醇后用蒸馏水抽提2h,反复洗至250ml容量瓶中,定容成样品液。吸取样品液0.5ml,按上述标准曲线操作步骤,测吸光度,按标准曲线和下式计算样品中多糖的百分含量。多糖含量(%)=CxDxF/W。式中,C为样品液中葡萄糖的浓度;D为样品液的稀释因素:F为换算因子;W为样品的重量。换算因子的测定,精确称取干操至恒重的精制野木瓜多糖(脱脂、去淀粉、去蛋白后乙醇沉淀的糖)4mg,置于50ml容量瓶中,加水溶解至刻度。吸取上述溶液1.0ml,测定吸光度,求出此精制多糖中葡萄糖的浓度,按下式计算出换算因子F,F=w/(cxD)。式
中,w为多糖重量(mg);C为精制多糖中葡萄糖的浓度(ug/ml),D为多糖的稀释因素。
以上是文献中测定的方法。我做的是麦麸中的阿拉伯木聚糖,提出的阿拉伯木聚糖已经过脱脂、去淀粉、去蛋白处理,然后乙醇沉淀的。现在我想测提取物中的总糖含量,用苯酚-硫酸法,那我要怎么计算换算因子呢?我提取的糖不就相当于精致多糖了吗?说的有点啰嗦哈~
14楼2013-07-20 14:39:59
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632295417

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
点点tina: 金币+1, ★★★很有帮助 2012-10-16 21:53:29
你用的是葡萄糖的标准曲线吗?你的曲线范围貌似有点大啊。你说的不是特别清楚啊。我说一下我做的吧,线性范围是10-50微克,把供试品稀释到那个范围内进行测定的。我的供试品要是你那么大的浓度的话,吸光度会很大很大。一般吸光度要求要小于1的
坚强勇敢的活着
2楼2012-10-16 10:25:48
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点点tina

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 632295417 at 2012-10-16 10:25:48
你用的是葡萄糖的标准曲线吗?你的曲线范围貌似有点大啊。你说的不是特别清楚啊。我说一下我做的吧,线性范围是10-50微克,把供试品稀释到那个范围内进行测定的。我的供试品要是你那么大的浓度的话,吸光度会很大很 ...

我用的是0.1mg/ml的多糖溶液,做出来的标准曲线是最大的0.015mg/ml吸光值是0.798.标准曲线是没有问题的。我说的数据是稀释后的,应该是稀释一百倍之后到0.70左右,可是我提取出来的是十倍之后0.7。所以我才想说是不是硫酸苯酚法有些测量不出来呢?
不好意思,这个实在是觉得数据太不靠谱了 谢谢
努力分离,好好解谱
3楼2012-10-16 12:26:24
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632295417

木虫 (正式写手)

0.1mg/ml的多糖溶液是纯品,标准品吗??你的意思是,标准品稀释100倍是0.7,你提的是稀释10倍0.7?我个人认为这个方法应该是没有问题的,不知道你是哪步计算错了,还是什么的。
坚强勇敢的活着
4楼2012-10-16 13:54:35
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