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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 请大家帮我看看我的southern blot 图片，不知道问题出在哪里了，谢谢
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爱笑的大脸猫

新虫 (小有名气)
你好，我也在做southern-blot，不过我是新手，做出来后背景特别高敢问大神该怎么解决？还有68℃  2×SSC，0.1%SDS 洗30min, 68℃  0.5×SSC，0.1%SDS 您是高压灭菌除菌还是过滤除菌？求回复，感激不尽！
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越努力，越幸运！
11楼2014-05-05 14:53:06
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wandahuan

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
11楼: Originally posted by 爱笑的大脸猫 at 2014-05-05 14:53:06
你好，我也在做southern-blot，不过我是新手，做出来后背景特别高敢问大神该怎么解决？还有68℃  2×SSC，0.1%SDS 洗30min, 68℃  0.5×SSC，0.1%SDS 您是高压灭菌除菌还是过滤除菌？求回复，感激不尽！

高温灭菌的。。。背景高可能是探针浓度过高了，吸取一点探针出来稀释3~5倍试试。。。Marker亮度如何？目的条带都能杂交出来么？
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12楼2014-05-07 14:37:32
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爱笑的大脸猫

新虫 (小有名气)
引用回帖:
12楼: Originally posted by wandahuan at 2014-05-07 14:37:32
高温灭菌的。。。背景高可能是探针浓度过高了，吸取一点探针出来稀释3~5倍试试。。。Marker亮度如何？目的条带都能杂交出来么？...

谢谢，我试着高压灭菌，把探针浓度降低5倍，阳性对照条带明显，但是实验组没有条带，我提取的DNA 浓度是238ng/ul用TAKALA的酶进行酶切，酶切体系是
EcoR1 1ul，BUf 2ul， DNA5ul(说明书上说DNA<1ug), 无菌水12ul，酶切后上样40ul,这样上样量才2ug。请问您是怎么保证上样量20ug的？？？谢谢
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越努力，越幸运！
13楼2014-05-12 09:27:38
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wandahuan

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
13楼: Originally posted by 爱笑的大脸猫 at 2014-05-12 09:27:38
谢谢，我试着高压灭菌，把探针浓度降低5倍，阳性对照条带明显，但是实验组没有条带，我提取的DNA 浓度是238ng/ul用TAKALA的酶进行酶切，酶切体系是
EcoR1 1ul，BUf 2ul， DNA5ul(说明书上说DNA<1ug), 无菌水12 ...

对不起额，最近上课比较忙，很久没来小木虫看了。。。我记得我是每次切100 ul 体系，79 ul DNA，（浓度200微克以上），单酶切的话 酶7微升，buffer 14ul，酶切5小时或者过夜都可以。。。。
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14楼2014-05-14 20:47:56
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爱笑的大脸猫

新虫 (小有名气)
引用回帖:
14楼: Originally posted by wandahuan at 2014-05-14 20:47:56
对不起额，最近上课比较忙，很久没来小木虫看了。。。我记得我是每次切100 ul 体系，79 ul DNA，（浓度200微克以上），单酶切的话 酶7微升，buffer 14ul，酶切5小时或者过夜都可以。。。。...

好的，谢谢，那你的上样量差不多就100ul 啊！？
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越努力，越幸运！
15楼2014-05-16 09:50:52
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webrother

银虫 (小有名气)
您好！ 我是一名southern blot新手，我想请教您一些实验经验？能留个联系方式交流吗？很期待您的回复！
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发扬钉子精神
16楼2016-01-23 23:18:04
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17621933862

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

你好，看见楼主SOUTHERN BLOT做的很好，我真是羡慕，我做nothernblot，总是做不出来
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17楼2019-05-27 13:02:44
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