11楼: Originally posted by 爱笑的大脸猫 at 2014-05-05 14:53:06
你好，我也在做southern-blot，不过我是新手，做出来后背景特别高敢问大神该怎么解决？还有68℃  2×SSC，0.1%SDS 洗30min, 68℃  0.5×SSC，0.1%SDS 您是高压灭菌除菌还是过滤除菌？求回复，感激不尽！

12楼: Originally posted by wandahuan at 2014-05-07 14:37:32
高温灭菌的。。。背景高可能是探针浓度过高了，吸取一点探针出来稀释3~5倍试试。。。Marker亮度如何？目的条带都能杂交出来么？...

13楼: Originally posted by 爱笑的大脸猫 at 2014-05-12 09:27:38
谢谢，我试着高压灭菌，把探针浓度降低5倍，阳性对照条带明显，但是实验组没有条带，我提取的DNA 浓度是238ng/ul用TAKALA的酶进行酶切，酶切体系是
EcoR1 1ul，BUf 2ul， DNA5ul(说明书上说DNA<1ug), 无菌水12 ...

14楼: Originally posted by wandahuan at 2014-05-14 20:47:56
对不起额，最近上课比较忙，很久没来小木虫看了。。。我记得我是每次切100 ul 体系，79 ul DNA，（浓度200微克以上），单酶切的话 酶7微升，buffer 14ul，酶切5小时或者过夜都可以。。。。...