应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 请大家帮我看看我的southern blot 图片，不知道问题出在哪里了，谢谢
51/1返回列表
查看: 3502  |  回复: 16
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

wandahuan

铜虫 (小有名气)

[求助] 请大家帮我看看我的southern blot 图片，不知道问题出在哪里了，谢谢 已有1人参与

southern blot 实验目的是为了验证突变体基因被敲除（1,2分别是两个不同突变体）
1.使用单酶切5小时左右；
2.基因组DNA浓度约为450ng/uL，上样量每孔50微升，跑胶（0.8%）5小时左右，条带很亮；
3.试剂盒是Roche Kit I, 洗脱条件为：68℃  2×SSC，0.1%SDS 洗30min, 68℃  0.5×SSC，0.1%SDS 洗15min，洗两次；
4.探针是PCR目的基因部分片段的回收产物，大小约为400和700bp。
问题：
探针第一和第二次用的相同，第一次Marker（TAKARA DL15000）未杂出条带，目的基因野生型与突变体有目的条带；
第二次-1基因做出来了，-2效果不太好；
第三次-1是新做的探针，有杂带，背景信号也很高，-2仍是之前的探针，却没有杂出目标条带。

麻烦大家帮我分析分析是什么原因，有什么好的解决方法。不甚感激~~~~

第一次-1.jpg



第一次-2.jpg



第二次-1.jpg



第二次-2.jpg



第三次-1.jpg



第三次-2.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-10-15 10:37:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lily981107

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

在任何实验中，只要提到是加热变性，煮沸后一定是要冰浴的，之前你没有冰浴吗？
赞一下 回复此楼
7楼2012-10-30 08:52:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 17 个回答

iriskye

银虫 (小有名气)
能不能请教您探针是怎么设计的？
赞一下 回复此楼
2楼2012-10-16 22:54:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wandahuan

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by iriskye at 2012-10-16 22:54:15
能不能请教您探针是怎么设计的？

PCR目标基因上游或者下游片段，回收后与marker煮沸后加入1号液制成。
赞一下 回复此楼
3楼2012-10-17 21:53:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lily981107

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
小丹木木: 金币+3, 鼓励积极交流经验 2012-10-24 15:13:47
是什么材料的总DNA？真菌的总量5-10ug即可，植物的20ug左右。图中判断似乎没有22ug的总量，总DNA量不够是原因之一。此外marker太多，加入5ng即可。建议下次加入用做探针的pcr产物做对照（多加一个孔），是监控反应体系的标准之一。如果marke和pcr产物对应条带都很清楚，而样品没有条带，其可能原因有两点：DNA量不够，转膜效率太低。
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2012-10-20 11:54:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 17 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 311求调剂 +6 南迦720 2026-02-28 6/300 2026-02-28 17:17 by 刘茉莉
[考研] 高分子化学与物理调剂 +3 好好好1233 2026-02-28 4/200 2026-02-28 17:13 by sandychj
[考博] 博士自荐 +3 kkluvs 2026-02-28 3/150 2026-02-28 16:59 by StarAura
[高分子] 求环氧树脂研发1名 +3 孙xc 2026-02-25 11/550 2026-02-28 16:57 by ichall
[考博] 博士推荐 +4 花儿笑? 2026-02-21 5/250 2026-02-28 16:55 by mumin1990
[考研] 0856材料求调剂 +8 hyf hyf hyf 2026-02-28 9/450 2026-02-28 16:27 by etapple
[考研] 285求调剂 +3 满头大汗的学生 2026-02-28 3/150 2026-02-28 16:22 by 无际的草原
[考研] 312求调剂 +4 吃宵夜1 2026-02-28 5/250 2026-02-28 16:11 by gjm133
[考博] 26申博 +3 想申博！ 2026-02-26 3/150 2026-02-28 16:07 by nxgogo
[考研] 材料类求调剂 +3 wana_kiko 2026-02-28 3/150 2026-02-28 15:03 by lature00
[考研] 290求调剂 +4 材料专硕调剂； 2026-02-28 5/250 2026-02-28 13:32 by houyaoxu
[考研] 0856调剂 +3 刘梦微 2026-02-28 3/150 2026-02-28 13:22 by houyaoxu
[考研] 寻找调剂 +3 LYidhsjabdj 2026-02-28 3/150 2026-02-28 12:59 by miniwendy
[考研] 304求调剂 +5 曼殊2266 2026-02-28 6/300 2026-02-28 12:44 by 迷糊CCPs
[硕博家园] 博士自荐 +6 科研狗111 2026-02-26 9/450 2026-02-28 12:32 by seaskyy
[考研] 298求调剂 +4 axyz3 2026-02-28 4/200 2026-02-28 11:21 by wang_dand
[基金申请] 什么是人一生最重要的？ +10 瞬息宇宙 2026-02-21 10/500 2026-02-27 08:46 by tfang
[基金申请] 面上可以超过30页吧？ +12 阿拉贡aragon 2026-02-22 13/650 2026-02-26 22:09 by Hahaxia
[教师之家] 版面费该交吗 +14 苹果在哪里 2026-02-22 17/850 2026-02-26 11:55 by AGI智创机器人
[硕博家园] 【博士招生】太原理工大学2026化工博士 +4 N1ce_try 2026-02-24 8/400 2026-02-26 08:40 by N1ce_try
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭