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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 请问提出rna来还有三条带，为什么dna酶消化检测后后，就拖带了？
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dmtxbb

金虫 (正式写手)

[求助] 请问提出rna来还有三条带，为什么dna酶消化检测后后，就拖带了？

请见图。。。为什么消化后检测就发现三条带没了。。。这咋了？？谢谢了

rna检测



消化后检测
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1楼 2012-10-15 09:41:12
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
5楼: Originally posted by dmtxbb at 2012-10-15 14:20:29
1、消化前点样的也用了3μ
2、15μ消化的，第一步buffer dnasei1和抑制剂，半小时，然后EDTA 10min
3、应该不会跑散了吧，maker都还完整呢。
谢谢你。...

DNase消化前最好定一下量，这会对酶的用量和作用效果有影响。如果样品太多可能造成消化不完全。不知道你定的哪的DNase，我都是消化完跑电泳的，也没见弥散。跑RNA的电泳液最好新配置。尤其是未经完全变性的RNA，很容易降解的。
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11楼2012-10-16 07:10:26
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你定量消化后的RNA了吗，上样量是多少？
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2楼2012-10-15 13:24:25
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dmtxbb

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-10-15 13:24:25
你定量消化后的RNA了吗，上样量是多少？

没有定量，我们准备消化完定量的。。上样量是3μ，消化完了就没了~
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3楼2012-10-15 13:35:43
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-10-15 13:53:29
dmtxbb: 金币+2, ★★★很有帮助, 谢谢 2012-10-15 14:07:18
引用回帖:
3楼: Originally posted by dmtxbb at 2012-10-15 13:35:43
没有定量，我们准备消化完定量的。。上样量是3μ，消化完了就没了~...

消化前看起来挺亮的，也是上了3ul？你拿多少做的消化，消化了多久？消化前最好也做个nanodrop，可以了解提的RNA大致的量和纯度，做消化的时候也可以根据量来用DNase。看你的第二张胶，好像跑得有点长，是不是跑久了扩散掉了？
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4楼2012-10-15 13:49:55
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