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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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weining1203

主管区长

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！

[求助] 关于XhoI和SacI双酶切的问题

看过一个回帖说两个酶切位点如果共用碱基就连不上表达载体，我选的 SacI（GAGCT C）和 Xhol（C TCGAG）酶切位点，这两个是不是共用碱基啊，那双酶切后连表达载体是不是就连不上上啊，求高手指导，可是分析我的序列只有这两个酶切位点可用，怎么办啊，还有如果连上的话，那么在目的序列会不会在载体上连反了

[ Last edited by weining1203 on 2012-10-14 at 22:53 ]
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1楼 2012-10-14 22:48:55
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weining1203

版主

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
引用回帖:
7楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-10-15 09:37:25
你分析的是对的，但是这也不能反连。反过来不仅是突出末端不对，而且序列也是互补的。你可以用一个什么软件分析所有的连接产物。这也是为什么要用两个不同的限制性内切酶做克隆的原因，可以不必筛正反了。...

看了您的回复，心里的石头终于落下了，不能反连就行。就是因为正向和反向连都互补，我才以为会有连反的概率。以后有问题再请教您，谢谢
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8楼2012-10-15 10:15:21
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cicelyzh

版主

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【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-10-15 13:46:44
两个酶切位点共用碱基不是连不上，而是可能切不开。要查看两个酶切位点是否共用碱基，你需要查看所用载体的多克隆位点的序列。有的时候共用碱基同步切不行可以分步切，你需要查看共用碱基的位置和酶切的位点来判断。但是最好不要选共用碱基的双酶切位点来克隆。
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2楼2012-10-15 01:18:39
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cicelyzh

管理员

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！

【答案】应助回帖

忘了说你提到的那两个酶切位点不是共用碱基。识别序列都是从5‘到3’写的，你那两个明显是不同的序列。只要不是同尾酶就不会发生连反的问题。
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weining1203
3楼2012-10-15 06:49:31
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weining1203

版主

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引用回帖:
3楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-10-15 06:49:31
忘了说你提到的那两个酶切位点不是共用碱基。识别序列都是从5‘到3’写的，你那两个明显是不同的序列。只要不是同尾酶就不会发生连反的问题。

谢谢您的回复，弱弱的问一句，什么事同尾酶？ 我自己在下面看了一下，酶切开的两端末端极有可能连反
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4楼2012-10-15 08:51:03
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