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weining1203

新虫 (小有名气)

[求助] 关于XhoI和SacI双酶切的问题

看过一个回帖说两个酶切位点如果共用碱基就连不上表达载体,我选的 SacI(GAGCT C)和 Xhol(C TCGAG)酶切位点,这两个是不是共用碱基啊,那双酶切后连表达载体是不是就连不上上啊,求高手指导,可是分析我的序列只有这两个酶切位点可用,怎么办啊,还有如果连上的话,那么在目的序列会不会在载体上连反了

[ Last edited by weining1203 on 2012-10-14 at 22:53 ]
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weining1203

新虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-10-15 09:37:25
你分析的是对的,但是这也不能反连。反过来不仅是突出末端不对,而且序列也是互补的。你可以用一个什么软件分析所有的连接产物。这也是为什么要用两个不同的限制性内切酶做克隆的原因,可以不必筛正反了。...

看了您的回复,心里的石头终于落下了,不能反连就行。就是因为正向和反向连都互补,我才以为会有连反的概率。以后有问题再请教您,谢谢
8楼2012-10-15 10:15:21
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-10-15 13:46:44
两个酶切位点共用碱基不是连不上,而是可能切不开。要查看两个酶切位点是否共用碱基,你需要查看所用载体的多克隆位点的序列。有的时候共用碱基同步切不行可以分步切,你需要查看共用碱基的位置和酶切的位点来判断。但是最好不要选共用碱基的双酶切位点来克隆。
2楼2012-10-15 01:18:39
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

忘了说你提到的那两个酶切位点不是共用碱基。识别序列都是从5‘到3’写的,你那两个明显是不同的序列。只要不是同尾酶就不会发生连反的问题。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

3楼2012-10-15 06:49:31
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weining1203

新虫 (小有名气)

送鲜花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-10-15 06:49:31
忘了说你提到的那两个酶切位点不是共用碱基。识别序列都是从5‘到3’写的,你那两个明显是不同的序列。只要不是同尾酶就不会发生连反的问题。

谢谢您的回复,弱弱的问一句,什么事同尾酶? 我自己在下面看了一下,酶切开的两端末端极有可能连反
4楼2012-10-15 08:51:03
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