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weining1203

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[求助] 关于XhoI和SacI双酶切的问题

看过一个回帖说两个酶切位点如果共用碱基就连不上表达载体，我选的 SacI（GAGCT C）和 Xhol（C TCGAG）酶切位点，这两个是不是共用碱基啊，那双酶切后连表达载体是不是就连不上上啊，求高手指导，可是分析我的序列只有这两个酶切位点可用，怎么办啊，还有如果连上的话，那么在目的序列会不会在载体上连反了

[ Last edited by weining1203 on 2012-10-14 at 22:53 ]

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【求助/交流】SacI酶切位点的保护碱基怎么加，碱基表上的酶切效率只有10%啊已经有3人回复

1楼 2012-10-14 22:48:55

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weining1203

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引用回帖:

3楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-10-15 06:49:31
忘了说你提到的那两个酶切位点不是共用碱基。识别序列都是从5‘到3’写的，你那两个明显是不同的序列。只要不是同尾酶就不会发生连反的问题。

双酶切后，目的序列：5    C    ATG...........TGA    C          3
                  TCGAG                               GAGCT

载体上的末端       GAGCT                                     TCGAG
                              C                                                    C
那么目的序列无论从5端到3端还是3端到5端都能和载体连接，不知道我这样分析对不对？