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petrel932562铜虫 (小有名气)
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[求助]
【求助/交流】 如何以已知肽链为模板，将其用用质粒表达，并设计相应的PCR引物
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标题可能不能好好地总结我的意思，完整如下： 我想把一段15个氨基酸的肽<假设为UU>用一个表达质粒表达出来，然后检测是就会有DNA水平的测序，RNA水平的PCR、蛋白质水平的WESTERN BLOT或者飞行质谱。 现在牵涉的问题是不想合成特异性抗体的话（很贵，还没有商品化针对这东西），就想做飞行质谱，那怎么提取表达后的蛋白质啊。。。。（我想设计的质粒是双表达的，它还会同时表达另一个蛋白<假设为PP>，它们到蛋白质时候会分成2个蛋白质的）就是这样混合着2个蛋白的怎么把它们分开。还有就是在RNA水平时的PCR引物应该怎么样设计（各种大原则我知道。。。）我就觉得如果DNA序列定了，它的引物不也就定了么。。。在那段序列的2端开始弄个16~20个碱基序列作为引物嘛！！！求各位大侠帮忙了。。。。金币不多。。。。因为我总共就没几个。。。。。还要自留几个求文献的。。。。 |
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