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大虾帮忙
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我构建载体：目的片断1800bp左右连接PMD-19载体回收提质粒， 载体psilent-1 6700bp,用ApaI 和XhoI 分别分步酶切，回收效果还可以，然后连接 T4连接酶 16度 过夜，然后转化大肠杆菌，然后菌落PCR鉴定阳性克隆，菌落PCR跑出来的大小和目的片断一样1800 左右，然后就提取质粒，可是 这个质粒提出来跑电泳却只有2500左右，怎么会那么小？，于是 今天我用ApaI切，出来了一条明亮的条带，也只有5000Bp,不知怎么 回事？ 我那个 应该是1800+6000多 = 起码都有8000撒，囊个会这样子也 ，哪位高手 帮帮我 看问题出在哪里! 明天准备再切一次，两个酶 分步酶切 看能切成我要的大小不 |
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