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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 弥散性条带 很急
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蓝Bud

新虫 (初入文坛)

[求助] 弥散性条带 很急

我总是p出弥散性条带，从点样孔至溴酚蓝，有时只有溴酚蓝处向点样孔方向延伸一片，有时在5000与3000间可见不清晰模板，不知道是哪里出问题，体系没问题的，我扩过50多个都出来了，而且很清晰，最后这四个不知道怎么了?拜托各位战友帮帮忙
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1楼 2012-10-09 16:36:14
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蓝Bud

新虫 (初入文坛)
???样的引物我也用过别的模版，没问题
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2楼2012-10-09 16:40:24
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
是不是模板浓度过高或者模板质量不好？
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3楼2012-10-10 08:57:22
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蓝Bud

新虫 (初入文坛)
嗯，我稀释一下试试，那我稀释多少倍最好呢?
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4楼2012-10-10 15:20:41
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蓝Bud

新虫 (初入文坛)
我的模板是鸡血DNA，自己提的
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5楼2012-10-10 15:56:15
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by 蓝Bud at 2012-10-10 15:20:41
嗯，我稀释一下试试，那我稀释多少倍最好呢?

有nanodrop吗，定下浓度，用100-200ng做模板。
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6楼2012-10-11 06:42:43
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蓝Bud

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-10-11 06:42:43
有nanodrop吗，定下浓度，用100-200ng做模板。...

没有，这里没法测浓度，而且，一直都是直接加100ul水溶解的，以前一直好好的，不知道为什么，新的引物新的PCR体系新的水，依然p出弥散，水p出来也是
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7楼2012-10-18 16:53:53
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by 蓝Bud at 2012-10-18 16:53:53
没有，这里没法测浓度，而且，一直都是直接加100ul水溶解的，以前一直好好的，不知道为什么，新的引物新的PCR体系新的水，依然p出弥散，水p出来也是...

你试着把模板稀释不同倍数P下看看。如果能隐约看到模板，那应该是量很大的了，通常PCR产物中是看不到模板的。
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8楼2012-10-19 08:15:55
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reallpf

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

降低模板浓度，提高退火温度，提高引物特异性，利用touch down PCR，电泳时注意合适的时间和更换新的电泳液。
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9楼2012-10-19 09:26:03
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蓝Bud

新虫 (初入文坛)
我已经p出来了，还是有弥散，但测序正确，只是将引物量由0.5，变为2，，我的引物是5pmol的
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10楼2012-11-29 09:16:11
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