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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 如何设计引物扩增片段？做克隆的
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wangqi20092

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
review: 金币+2, 谢谢！ 2012-10-08 13:13:07
肯定要在CDS区设计，要不然表达的也不是你要的蛋白，如果是原核表达的话还要考虑不能移码突变，如果要定位还要考虑终止密码子要不要。oligo设计比较好用。自己学怎么设计！！！
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11楼2012-10-04 12:29:21
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mamadexiao

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
review: 金币+10, ★★★★★最佳答案, 你的回复很给力！其实我自己还不怎么清楚 所以问得也不好 明白了再问 2012-10-08 13:11:21
简单的很
首先，分析下你要用的质粒，在这个质粒可以插入的多克隆位点中找到你们实验室用的比较多的几个酶
然后再NCBI里把你的基因序列搞出来，要用CDS区的
一般都写着呢，CDS是编码片段，一般就是从ATG 开始的
然后，把你的序列用PRIMER5或者OLIGO7分析下，看看里面的限制性酶切位点都有哪些，这些位点以外的限制性内切酶，就是你可以选择的
看看有没有你们实验室常用的

限制性酶切位点+上/下游引物
如果你的是那种T载体
就更简单了
用能加A的聚合酶，直接扩
当然引物也得包括你的基因的CDS区
赞一下(3人) 回复此楼
12楼2012-10-05 21:23:54
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