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boylover123

金虫 (初入文坛)

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[交流] 关于Transwell迁移实验的一些问题

最近在做Transwell迁移实验，但一直不是很成功，下面有几个问题想跟大家探讨一下，还请各位虫友不吝赐教。
1、上层小室加的细胞悬液为什么要含0.5%的BSA，BSA的作用是什么。
2、下层我用的是含5%FBS的培养基，曾经用过0.4%FBS的培养基，细胞没迁移过去，下层小室FBS是不是含量越低越好。
3、还有就是transwell小室实验前需不需要怎么处理一下，比如用无血清培养基浸润半个小时什么的。
4、加完细胞悬液后一般多长时间染色观察，我看文献有说5h，但是我觉得5h根本都迁移不过去。

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1楼2012-09-29 11:04:52

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凝冰897

铁杆木虫 (著名写手)

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★
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引用回帖:

25楼: Originally posted by 11011020032 at 2015-09-07 16:49:53
想问一下，transwell迁移实验，最后显微镜拍照的时候，拍照视野怎么选啊？要拍几张合适呢？万分感谢。...

好久了啊，呵呵

我记得应该是这样的：首先迁移的细胞要大致均匀，否则怎么都不好选（如果是侵袭实验，那么严重不均匀的实验结果本身也不可信，因为相当于某处穿了一个“洞”，然后剩下的细胞就不必降解基底膜了，直接麻溜地聚集到那里钻过去就行了）；大致均匀的前提下，选取某条直径上的五个视野拍照，然后计数，取平均值，这是一次；再选取另一条直径，结果作为第二次；第三次相同。三次的计数除以阴性对照组的计数（方法相同），得到的百分率即为迁移率。然后三次计算得到的迁移率取平均值，算标准差，得到最后结果

这是最严谨的一种~~