应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助：用BacterioMatch®II Two-Hybrid System对两个蛋白进行细菌双杂交
52/1返回列表
查看: 1756  |  回复: 15
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)

[求助] 求助：用BacterioMatch®II Two-Hybrid System对两个蛋白进行细菌双杂交 已有2人参与

1、如题，不知有谁用过这个系统进行细菌双杂交的实验？
2、XL1-Blue MRF´ Kan这个菌有三株，其实当验证两个特定的蛋白是否有相互作用时，是否用其中的任意一株都可以的？
3、如果两个蛋白确实是有相互作用的，在板上应该菌体应该长成什么样子？做到最后一步涂板后我的阳性对照、阴性对照还有目的菌长的都很小，菌体是否会长的比较大一点？是否会像DH5a或者Top10过夜在板上生长的样子？
谢谢！
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2012-09-28 10:29:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)
引用回帖:
11楼: Originally posted by xiaodi1010 at 2014-02-21 19:27:26
看基因型上面的没有问题，但是我用下面的菌也做出来了，所以应该也没有问题的。非常感谢~

基因型是不同的啊！Validation Reporter Cells与XL1-Blue MRF′ Kan 的his B 基因不同啊，这个就是条件筛选的关键吧。所 ...

有道理，我重新看了一下确实应该是用Validation Reporter Cells的，谢谢~
赞一下 回复此楼
12楼2014-02-22 15:20:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 16 个回答

11ychen

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
zhuifeng7000: 金币+5, ★有帮助, 感谢交流~ 2012-11-01 23:09:23
小丹木木: 金币+3, 鼓励积极交流经验 2012-11-02 13:35:12
我之前也是做细菌双杂交的，XL1-Blue MRF´ Kan这个菌只是用于前期载体构建使用的，不可用于来两种蛋白相互作用的筛选，进行该步骤使用的是reporter competent cell。如果两种蛋白相互作用的话，在3-AT平板上可以长出一些单菌落，使用引物pBT F/R and pTRG F/R扩增时，是可以扩增出相应条带的。培养时间是需要很长（40h），不过结果还是可行的。不过它的菌落形态与DH5a不同。
赞一下 回复此楼
2楼2012-11-01 11:35:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 11ychen at 2012-11-01 11:35:14
我之前也是做细菌双杂交的，XL1-Blue MRF´ Kan这个菌只是用于前期载体构建使用的，不可用于来两种蛋白相互作用的筛选，进行该步骤使用的是reporter competent cell。如果两种蛋白相互作用的话，在3-AT平板 ...

我开始也有这个怀疑，但是我看了公司的protocol后发现其实XL1-Blue MRF这个菌的基因型和reporter competent cell是一模一样的，只不多不同的菌转化效率不同，其他的似乎没什么区别，从原理上来说的话只要激活报告系统就可以生长，XL1-Blue MRF也是含有报告系统的，所以我觉得用这个菌做后面的验证应该也没有问题吧？
非常感谢交流~
赞一下 回复此楼
3楼2012-11-01 23:08:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

11ychen

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by zhuifeng7000 at 2012-11-01 23:08:59
我开始也有这个怀疑，但是我看了公司的protocol后发现其实XL1-Blue MRF这个菌的基因型和reporter competent cell是一模一样的，只不多不同的菌转化效率不同，其他的似乎没什么区别，从原理上来说的话只要激活报告系 ...

这个我个人觉得还是有问题的，不知道你有没有尝试对XL1-Blue MRF进行共转化，我有试过，不知道是自己试验出问题了，还是本来就不可用于双杂家？当用引物扩增时，只有一种对应的蛋白条带出现？所以还是建议使用reporter cell。能否分享一下这些菌的基因型。谢谢！
赞一下 回复此楼
4楼2012-11-03 19:45:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 16 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 申博26年 +3 八6八68 2026-03-19 3/150 2026-03-19 19:43 by nxgogo
[考博] 东华理工大学化材专业26届硕士博士申请 +8 zlingli 2026-03-13 8/400 2026-03-19 16:32 by 轻松不少随
[考研] 085600材料与化工求调剂 +6 绪幸与子 2026-03-17 6/300 2026-03-19 13:27 by houyaoxu
[考研] 287求调剂 +3 晨昏线与星海 2026-03-19 4/200 2026-03-19 12:32 by peike
[考研] 材料考研调剂 +3 xwt。 2026-03-19 3/150 2026-03-19 11:22 by w沐阳w
[考研] 085700资源与环境308求调剂 +3 墨墨漠 2026-03-18 3/150 2026-03-18 22:35 by bingxueer79
[考研] 280求调剂 +6 咕噜晓晓 2026-03-18 7/350 2026-03-18 11:25 by 无际的草原
[考博] 环境领域全国重点实验室招收博士1-2名 +3 QGZDSYS 2026-03-13 5/250 2026-03-18 11:13 by QGZDSYS
[考研] 工科材料085601 279求调剂 +6 困于星晨 2026-03-17 6/300 2026-03-18 10:21 by kkcoco25
[考研] 301求调剂 +9 yy要上岸呀 2026-03-17 9/450 2026-03-18 08:58 by 无际的草原
[考研] 293求调剂 +11 zjl的号 2026-03-16 16/800 2026-03-18 08:10 by zhukairuo
[硕博家园] 湖北工业大学 生命科学与健康学院-课题组招收2026级食品/生物方向硕士 +3 1喜春8 2026-03-17 5/250 2026-03-17 17:18 by ber川cool子
[考研] 308求调剂 +4 是Lupa啊 2026-03-16 4/200 2026-03-17 17:12 by ruiyingmiao
[考研] 275求调剂 +4 太阳花天天开心 2026-03-16 4/200 2026-03-17 10:53 by 功夫疯狂
[考研] 一志愿211 0703方向310分求调剂 +3 努力奋斗112 2026-03-15 3/150 2026-03-16 16:44 by houyaoxu
[考研] 277材料科学与工程080500求调剂 +3 自由煎饼果子 2026-03-16 3/150 2026-03-16 14:10 by 运气yunqi
[考研] 327求调剂 +6 拾光任染 2026-03-15 11/550 2026-03-15 22:47 by 拾光任染
[考研] 本科南京大学一志愿川大药学327 +3 麦田耕者 2026-03-14 3/150 2026-03-14 20:04 by 外星文明
[考研] 297求调剂 +4 学海漂泊 2026-03-13 4/200 2026-03-14 11:51 by 热情沙漠
[考博] 福州大学杨黄浩课题组招收2026年专业学位博士研究生，2026.03.20截止 +3 Xiangyu_ou 2026-03-12 3/150 2026-03-13 09:36 by duanwu655
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭