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lcj_83111

银虫 (小有名气)

[交流] 克隆高GC含量的基因

请教各位师兄师姐,怎样克隆高GC含量的基因,比如克隆链霉菌的基因,如果不用专用的Taq酶和Buffer。我试过在反应体系中加不同浓度的DMSO和甘油,都没有结果,请问大家有其他好的建议吗?
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lgj7966

铜虫 (初入文坛)


johnsooh(金币+1):thanks
克隆高GC含量的模板,难度比较大。主要是在PCR过程中,你可以在PCR的BUFFER中加入几种PCR增强剂,预变性10分钟后在加入聚合酶。如果是长片段,建议你在基因中间选择合适的DNA内切酶位点进行分段扩增和克隆。
9楼2007-07-20 13:04:09
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zhuzhu206

金虫 (小有名气)


johnsooh(金币+1):谢谢帮助!
你可以试试提高退火温度。
2楼2007-06-12 12:02:24
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biogefart

木虫 (著名写手)


johnsooh(金币+1):谢谢帮助!
退火温度影响可能比较小,你可以试试,我一般都用甜菜碱。效果好于DMSO
闹太套
3楼2007-06-13 07:18:19
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lcj_83111

银虫 (小有名气)


johnsooh(金币+1):别轻言放弃, "科研有险阻,交流能通达", 小木虫生物会支持你的!
我都要放弃了,谢谢二位给我的宝贵意见,我会再摸索条件!非常感谢!
4楼2007-06-13 14:25:42
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