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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 克隆高ＧＣ含量的基因
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lcj_83111

银虫 (小有名气)

[交流] 克隆高ＧＣ含量的基因

请教各位师兄师姐，怎样克隆高ＧＣ含量的基因，比如克隆链霉菌的基因，如果不用专用的Ｔａｑ酶和Ｂｕｆｆｅｒ。我试过在反应体系中加不同浓度的ＤＭＳＯ和甘油，都没有结果，请问大家有其他好的建议吗？
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1楼 2007-06-11 21:56:22
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zhuzhu206

金虫 (小有名气)
★
johnsooh(金币+1):谢谢帮助!
你可以试试提高退火温度。
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2楼2007-06-12 12:02:24
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biogefart

木虫 (著名写手)
★
johnsooh(金币+1):谢谢帮助!
退火温度影响可能比较小，你可以试试，我一般都用甜菜碱。效果好于DMSO
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闹太套
3楼2007-06-13 07:18:19
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lcj_83111

银虫 (小有名气)
★
johnsooh(金币+1):别轻言放弃, "科研有险阻,交流能通达", 小木虫生物会支持你的!
我都要放弃了，谢谢二位给我的宝贵意见，我会再摸索条件！非常感谢！
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4楼2007-06-13 14:25:42
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tuotuozw

银虫 (小有名气)
试一试takala的扩增GC专用的TAQ酶啊！
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5楼2007-06-14 03:43:21
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lcj_83111

银虫 (小有名气)
谢谢版主和各位对我的鼓励！
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6楼2007-06-15 09:26:43
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linglan2612

金虫 (正式写手)
呵呵,我用GC buffer 扩的高ＧＣ含量的片段，效果不错啊，我扩的启动子，这种BUFFER好像５５元左右一只，建议试一下哦，如果需要，我把反应体系给你，QQ:375759369
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任务分解，做好计划，减少情绪对抗
7楼2007-06-15 09:35:35
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松虱

金虫 (正式写手)
对，除了退火温度升高外，有专门的适合gc含量高的gc buffer 可以试试。
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8楼2007-06-15 16:01:39
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lgj7966

铜虫 (初入文坛)
★
johnsooh(金币+1):thanks
克隆高GC含量的模板，难度比较大。主要是在PCR过程中，你可以在PCR的BUFFER中加入几种PCR增强剂，预变性10分钟后在加入聚合酶。如果是长片段，建议你在基因中间选择合适的DNA内切酶位点进行分段扩增和克隆。
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9楼2007-07-20 13:04:09
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killjap

铜虫 (小有名气)
★
johnsooh(金币+1):谢谢鉴定...
引用回帖:
Originally posted by
退火温度影响可能比较小，你可以试试，我一般都用甜菜碱。效果好于DMSO

这位老兄的论点是有依据的。我曾经看到过一篇文献，介绍用甜菜碱作为添加剂，扩增高GC含量的片断。但是当年我没有发现哪个公司卖这个。楼主可以试试。

[ Last edited by killjap on 2007-7-20 at 21:43 ]
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10楼2007-07-20 21:41:37
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