应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 克隆高ＧＣ含量的基因
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
121/2返回列表12下一页
查看: 914  |  回复: 11
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

lcj_83111

银虫 (小有名气)

[交流] 克隆高ＧＣ含量的基因

请教各位师兄师姐，怎样克隆高ＧＣ含量的基因，比如克隆链霉菌的基因，如果不用专用的Ｔａｑ酶和Ｂｕｆｆｅｒ。我试过在反应体系中加不同浓度的ＤＭＳＯ和甘油，都没有结果，请问大家有其他好的建议吗？
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2007-06-11 21:56:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhuzhu206

金虫 (小有名气)
★
johnsooh(金币+1):谢谢帮助!
你可以试试提高退火温度。
赞一下(10人) 回复此楼
2楼2007-06-12 12:02:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

biogefart

木虫 (著名写手)
★
johnsooh(金币+1):谢谢帮助!
退火温度影响可能比较小，你可以试试，我一般都用甜菜碱。效果好于DMSO
赞一下(10人) 回复此楼
闹太套
3楼2007-06-13 07:18:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lcj_83111

银虫 (小有名气)
★
johnsooh(金币+1):别轻言放弃, "科研有险阻,交流能通达", 小木虫生物会支持你的!
我都要放弃了，谢谢二位给我的宝贵意见，我会再摸索条件！非常感谢！
赞一下(10人) 回复此楼
4楼2007-06-13 14:25:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tuotuozw

银虫 (小有名气)
试一试takala的扩增GC专用的TAQ酶啊！
赞一下 回复此楼
5楼2007-06-14 03:43:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lcj_83111

银虫 (小有名气)
谢谢版主和各位对我的鼓励！
赞一下 回复此楼
6楼2007-06-15 09:26:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

linglan2612

金虫 (正式写手)
呵呵,我用GC buffer 扩的高ＧＣ含量的片段，效果不错啊，我扩的启动子，这种BUFFER好像５５元左右一只，建议试一下哦，如果需要，我把反应体系给你，QQ:375759369
赞一下 回复此楼
任务分解，做好计划，减少情绪对抗
7楼2007-06-15 09:35:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

松虱

金虫 (正式写手)
对，除了退火温度升高外，有专门的适合gc含量高的gc buffer 可以试试。
赞一下 回复此楼
8楼2007-06-15 16:01:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lgj7966

铜虫 (初入文坛)
★
johnsooh(金币+1):thanks
克隆高GC含量的模板，难度比较大。主要是在PCR过程中，你可以在PCR的BUFFER中加入几种PCR增强剂，预变性10分钟后在加入聚合酶。如果是长片段，建议你在基因中间选择合适的DNA内切酶位点进行分段扩增和克隆。
赞一下(10人) 回复此楼
9楼2007-07-20 13:04:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

killjap

铜虫 (小有名气)
★
johnsooh(金币+1):谢谢鉴定...
引用回帖:
Originally posted by
退火温度影响可能比较小，你可以试试，我一般都用甜菜碱。效果好于DMSO

这位老兄的论点是有依据的。我曾经看到过一篇文献，介绍用甜菜碱作为添加剂，扩增高GC含量的片断。但是当年我没有发现哪个公司卖这个。楼主可以试试。

[ Last edited by killjap on 2007-7-20 at 21:43 ]
赞一下(10人) 回复此楼
10楼2007-07-20 21:41:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 lcj_83111 的主题更新
121/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 工科277分求调剂材料 +4 上了上了上哦 2026-04-05 4/200 2026-04-05 10:11 by lbsjt
[考研] 288环境专硕,求调材料方向 +13 lllllos 2026-04-04 14/700 2026-04-04 23:34 by lqwchd
[考研] 求调剂 一志愿西南交通大学085701环境工程 282分 +5 多多爱吃汉堡 2026-04-04 5/250 2026-04-04 22:14 by 啵啵啵0119
[考研] 材料调剂 +12 一样YWY 2026-04-02 13/650 2026-04-04 20:49 by 蓝云思雨
[考研] 324求调剂 +14 想上学求调 2026-04-02 15/750 2026-04-04 20:31 by 无际的草原
[考研] 求生物学调剂 +14 15172915737 2026-04-01 14/700 2026-04-04 20:13 by babysonlkd
[考研] 272求调剂 +4 松柏常青5 2026-04-03 4/200 2026-04-04 17:03 by babysonlkd
[考研] 085600，专业课化工原理，320分求调剂 +8 大馋小子 2026-03-29 8/400 2026-04-04 16:21 by dongzh2009
[考研] 复试调剂 +6 范根培 2026-04-04 6/300 2026-04-04 14:27 by 土木硕士招生
[考研] 280求调剂 +21 咕噜晓晓 2026-04-02 22/1100 2026-04-04 11:12 by 猪会飞
[考研] 求调剂 +3 wos666 2026-04-03 3/150 2026-04-04 05:16 by gswylq
[考研] 学硕机械工程303求调剂 +6 无名所以叫吴明 2026-03-30 7/350 2026-04-03 16:48 by asdfzly
[基金申请] esi高被引论文是不是能对中标有所加分和帮助呢 +5 redcom 2026-04-01 6/300 2026-04-03 15:15 by Howard28
[考研] 求调剂机会 +5 意染ivy 2026-04-03 5/250 2026-04-03 15:13 by qoooooo614
[考研] 08工科，295，接受跨专业调剂 +8 lmnlzy 2026-03-30 8/400 2026-04-03 13:08 by nalakaiqi
[考研] 315分 085602 求调剂 +15 26考研上岸版26 2026-04-02 15/750 2026-04-03 12:45 by xingguangj
[考研] 材料340分调剂 +7 夏夜晚风_long 2026-04-02 9/450 2026-04-02 21:20 by dongzh2009
[考研] 267求调剂 +13 uiybh 2026-03-31 13/650 2026-04-01 10:25 by 探123
[考研] 吉大生物学326分求调剂 +3 sunnyupup 2026-03-31 3/150 2026-03-31 09:28 by longlotian
[考研] 哈尔滨工业大学材料与化工专硕378求调剂 +3 塔比乌斯 2026-03-30 3/150 2026-03-30 22:55 by 无际的草原
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭