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lcj_83111

银虫 (小有名气)

[交流] 克隆高GC含量的基因

请教各位师兄师姐,怎样克隆高GC含量的基因,比如克隆链霉菌的基因,如果不用专用的Taq酶和Buffer。我试过在反应体系中加不同浓度的DMSO和甘油,都没有结果,请问大家有其他好的建议吗?
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zhuzhu206

金虫 (小有名气)


johnsooh(金币+1):谢谢帮助!
你可以试试提高退火温度。
2楼2007-06-12 12:02:24
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biogefart

木虫 (著名写手)


johnsooh(金币+1):谢谢帮助!
退火温度影响可能比较小,你可以试试,我一般都用甜菜碱。效果好于DMSO
闹太套
3楼2007-06-13 07:18:19
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lcj_83111

银虫 (小有名气)


johnsooh(金币+1):别轻言放弃, "科研有险阻,交流能通达", 小木虫生物会支持你的!
我都要放弃了,谢谢二位给我的宝贵意见,我会再摸索条件!非常感谢!
4楼2007-06-13 14:25:42
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tuotuozw

银虫 (小有名气)

试一试takala的扩增GC专用的TAQ酶啊!
5楼2007-06-14 03:43:21
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lcj_83111

银虫 (小有名气)

谢谢版主和各位对我的鼓励!
6楼2007-06-15 09:26:43
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linglan2612

金虫 (正式写手)

呵呵,我用GC buffer 扩的高GC含量的片段,效果不错啊,我扩的启动子,这种BUFFER好像55元左右一只,建议试一下哦,如果需要,我把反应体系给你,QQ:375759369
任务分解,做好计划,减少情绪对抗
7楼2007-06-15 09:35:35
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松虱

金虫 (正式写手)

对,除了退火温度升高外,有专门的适合gc含量高的gc buffer 可以试试。
8楼2007-06-15 16:01:39
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lgj7966

铜虫 (初入文坛)


johnsooh(金币+1):thanks
克隆高GC含量的模板,难度比较大。主要是在PCR过程中,你可以在PCR的BUFFER中加入几种PCR增强剂,预变性10分钟后在加入聚合酶。如果是长片段,建议你在基因中间选择合适的DNA内切酶位点进行分段扩增和克隆。
9楼2007-07-20 13:04:09
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killjap

铜虫 (小有名气)


johnsooh(金币+1):谢谢鉴定...
引用回帖:
Originally posted by
退火温度影响可能比较小,你可以试试,我一般都用甜菜碱。效果好于DMSO

这位老兄的论点是有依据的。我曾经看到过一篇文献,介绍用甜菜碱作为添加剂,扩增高GC含量的片断。但是当年我没有发现哪个公司卖这个。楼主可以试试。

[ Last edited by killjap on 2007-7-20 at 21:43 ]
10楼2007-07-20 21:41:37
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