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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 有重组质粒，如何获得其载体？
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chzhbin

金虫 (职业作家)

[求助] 有重组质粒，如何获得其载体？

小弟刚接触质粒，请教下各位高手。请公司用pcDNA3.1+连接了某目的基因，构建了重组质粒。实验需要设立对照组，即pcDNA3.1+的空载进行转染。是否可以从该重组上酶切获得纯的pcDNA3.1+，实验是否复杂，大概需要多长时间？是否还有其他可以获得该载体的方法？买的话好像要4000多。

不甚感激！
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1楼 2012-09-23 17:05:47
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houchm0927

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-09-25 14:27:22
chzhbin: 金币+4, ★有帮助 2012-12-19 20:35:16
我觉得楼主的想法可行性不大。你不知道别人将野生型质粒的哪一段切下来的，就算查出来切下了哪一段，你没有模板又怎么把这一段自己合成出来。
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4楼2012-09-24 20:02:43
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gwd0312

木虫 (正式写手)

“无冕之王”

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
chzhbin: 金币+3 2012-12-19 20:34:53
酶切理论上是可以，但是你要选择好酶切位点，切完之后还要保证能连上去，操作比较有难度！
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持之以恒、永不放弃！
2楼2012-09-23 23:13:59
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dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-09-24 10:32:07
chzhbin: 金币+4, ★有帮助 2012-12-19 20:35:06
我觉得不行，你很难从重组质粒获得野生型的质粒。
首先你不知道人家是怎么构建的，被切掉的那一段序列是什么，你是不知道的。
如果觉得买，太贵了，你可以找其他虫虫交换质粒试试。
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3楼2012-09-24 09:21:09
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Marado

金虫 (正式写手)

Dreamer

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-09-25 14:27:32
chzhbin: 金币+4 2012-12-19 20:35:28
我觉得从理论上就很难操作……你重组质粒是野生质粒切掉不部分碱基换上目的片段后构成的…………切掉的不部分碱基你怎么去弄回去？直接拿去合成？然后再连接？不觉得麻烦麽.
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Look,ifyouhadoneshot,oroneopportunity,toseizeeverythingyoueverwanted,inonemoment.Wouldyoucaptureit,orjustletitslip?
5楼2012-09-25 08:54:20
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