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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 质粒电泳问题
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xuyan_1215

新虫 (小有名气)

[求助] 质粒电泳问题

最近做酶切，遇到一个非常神奇的事情。 希望大家能够解释下，非常感谢！
1.双酶切后，质粒大小与理论符合；
2.原质粒没有酶切，但是却比酶切后的质粒跑得慢！！！
一般质粒提出来之后以超螺旋形态的居多，而且超螺旋在电泳中的迁移速度最快，为什么会跑在线性的之后呢？真神奇，几次都是同样的结果，是不是质粒有问题啊？我用宝生物、生工的试剂盒提取了之后都是这样，这是怎么回事呢？
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1楼 2012-09-20 10:51:07
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ysn5048

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
9楼: Originally posted by xuyan_1215 at 2012-09-20 18:54:29
我再确认一下吧，已经开始做连接了，如果这一步有问题，下面根本就不能成功。两个酶切位点之间就差了29bp，双酶切之后的条带是不是也不大正常啊，怎么离5000那么近，你看呢？...

如果楼主跑的质粒是pET28a+某个大片段，这样的话酶切后连接也是有可能成功的，因为如果保留有楼主所用的酶切位点的话是可以切开的，而且可以有正常的线性pET28a，但从楼主酶切后的图来看，的确是没有发现其他的条带，这的确是诡异啊
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有时候，一句话，可以改变未来
11楼2012-09-20 19:30:28
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ysn5048

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
楼主能不能把质粒的情况说的具体点，是载体质粒？大小大概是多少？如果能附图就更好了
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有时候，一句话，可以改变未来
2楼2012-09-20 13:03:08
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xuyan_1215

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by ysn5048 at 2012-09-20 13:03:08
楼主能不能把质粒的情况说的具体点，是载体质粒？大小大概是多少？如果能附图就更好了

我的质粒是pET28a，5.3kb左右，用的marker是5000的，如图所示，marker旁边的是原质粒，其次是双酶切之后的质粒，结果很匪夷所思。。。请你帮忙分析看看。
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3楼2012-09-20 14:31:09
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xuyan_1215

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by ysn5048 at 2012-09-20 13:03:08
楼主能不能把质粒的情况说的具体点，是载体质粒？大小大概是多少？如果能附图就更好了

附图如下：

Administrator 2012-09-19 16hr 40min.jpg
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4楼2012-09-20 14:34:22
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