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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » PCR空白跑出了与目的基因一样的一条浅带
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yixuan1

新虫 (初入文坛)

[求助] PCR空白跑出了与目的基因一样的一条浅带 已有4人参与

我最近PCR时，空白跑出了目的基因的条带，不过条带比较浅，阳性对照的比较亮，阴性对照没有。我把枪头，引物，配胶的溶剂以及电泳液都换成新的了，可是还是有条带，哪位好心的大侠指点下，这是哪里出了问题了呀？
PS:以前没有
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1楼 2012-09-18 17:48:55
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peterrjp

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

PCR污染的原因有很多种：
水、引物等试剂里混入的污染物 （换试剂）
取样枪不干净 （用前用酒精擦洗）
超净台过滤网长期不搞清洁 （拆下来除尘）
空气中的气溶胶 （实验前实验室多通风）
……
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14楼2014-10-21 15:03:29
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无疆@行者

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+1, 鼓励发帖交流 2012-09-19 05:43:25
你得说清楚阴性对照是什么，是无模板吗？如果是的话可能是引物或者水有问题
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2楼2012-09-18 18:30:54
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gaorongbest

新虫 (小有名气)
★ ★
wizardfan: 金币+2, 很详细的经验分享，赞 2012-09-19 05:43:03
你做的是DNA的PCR还是RNA反转录呢？我排查了一下，PCR无非就那么几个关键的东西，一般最容易污染的是引物，但是引物已经换了；枪头一般都是一次性的影响不大，RNA的话对配胶容器要求严格；那最可能就是水污染了（还有：空白和模板是在一起的还是空白空中溢入模板DNA了？），你的水是高压后分装用吗？最好换一支水试试，其他的没了。
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3楼2012-09-18 20:56:52
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hch123

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你可以试试PCR时，先加混合液，再加空白，再加模版。实验室经验，但有时很有用。还是不行的话，建议你换下试剂，尤其是水。
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脚踏实地：遇一个，学一个，会一个。。。
4楼2012-09-19 08:34:53
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查看全部 17 个回答
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