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菌种保藏问题
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我要保藏的是牛奶中的嗜冷菌 那么我能用脱脂乳来代替甘油吗？ 是否直接挑一环单菌落加入培养液和脱脂奶混合的冻干管中-80度冻干就可以了？ 嗜冷菌保藏用的保护剂跟一般的乳酸菌能一样吗？ 求助完整详细的嗜冷菌冻干方法。谢谢谢谢 [ Last edited by yonny1018 on 2012-9-12 at 17:34 ] |
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【答案】应助回帖
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感谢参与，应助指数 +1
yonny1018: 金币+5 2012-09-14 12:08:25
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yonny1018: 金币+5 2012-09-14 12:08:25
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来个详细的，此法也适用于嗜冷菌。 1. 冷冻干燥管的制备 安瓿管材料以中性玻璃为宜。清洗安瓿管时，先用2%盐酸浸泡过夜，自来水冲洗干净后，用蒸馏水浸泡至pH中性，干燥后121℃下加压灭菌20分钟，备用。 2. 保护剂的准备 12%的脱脂乳，121℃下加压灭菌15分钟，4℃冰箱冷藏备用。 3. 冻干样品的准备 在最适宜的培养条件下将待保藏的微生物培养至静止期或成熟期，若是液体培养需离心除去培养基；若是固体培养，以接种环刮取菌体（或用棉签刮取）与保护剂混合均匀，分装。培养物浓度以细胞或孢子不少于108-1010个/ml为宜。用较长的毛细滴管，滴入安瓿管底部，注意不要溅污上部管壁，每管分装量约0.1毫升。分装安瓿管，时间尽量要短，分装后立即预冻。 4. 预冻 先放4℃冰箱，半小时后放-20℃冰箱。一般预冻2小时以上。 5. 冷冻干燥 将冷冻后的样品安瓿管置于冷冻干燥机的干燥箱内，开始冷冻干燥，时间一般为8-20小时。终止干燥时间应根据下列情况判断： —— 安瓿管内冻干物呈酥块状或松散片状； —— 真空度接近空载时的最高值； —— 样品温度与管外温度接近； —— 选用1-2支对照管，内装蒸馏水，其水份装量与菌悬液同量，当水分完全升华后，可视为干燥完结； —— 选用一个安瓿管，装1-2%氯化钴，如变深兰色，可视为干燥完结。 冷冻干燥完毕后，取出样品安瓿管置于干燥器内，备用。 6. 真空封口及真空检验 真空显示0.021mPa以下，在真空条件下将安瓿管腰部加热熔封。熔封后的干燥管可采用高频电火花真空测定仪测定真空度. 7. 保藏 安瓿管4℃冷柜避光保存。 8. 冷冻干燥法适用范围 大多数细菌、放线菌、病毒、噬菌体、立克次体、霉菌和酵母菌等的保藏，不适用于霉菌的菌丝型、菇类、藻类和原虫等。 9. 保藏周期 不同微生物的保藏周期不同，一般在10年左右。 10. 复苏方法 —— 先用70%酒精棉花擦拭安瓿上部， —— 将安瓿管顶部烧热， —— 用无菌棉签沾冷水，在顶部擦一圈，顶部出现裂纹，用挫刀或镊子颈部轻叩一下，敲下已开裂的安瓿管的顶端， —— 用培养液溶解菌块，使用无菌吸管移入新鲜培养基上，进行适温培养。 |
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