| 查看: 1955 | 回复: 7 | ||
| 本帖产生 1 个 BioEPI ，点击这里进行查看 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
[求助]
WB问题
|
||
| 跪求各位大神，我刚开始做WB，我的分子量是80KD是植物核蛋白，提的植物的总蛋白，5% +10%电泳5小时，maker还没完全跑出浓缩胶，就一起进行80V恒压湿法转PVDF0.22膜转6个小时，转完后染胶无条带，转完后是用的试剂盒，封闭，稀释抗体，洗膜都是用试剂盒里的blocking buffer（5%脱脂奶粉PBST稀释），封闭一个小时，洗都洗5次只是每次加的量不多，压膜曝光2小时，结果背景很深看不到目的带，maker只看到一条带,求分析原因 |
回复此楼» 猜你喜欢
313求调剂
已经有3人回复
-
083000学硕274求调剂
已经有11人回复
-
环境工程 085701，267求调剂
已经有11人回复
-
291求调剂
已经有12人回复
-
一志愿中海洋320化学工程与技术学硕求调剂
已经有7人回复
-
08工科，295，接受跨专业调剂
已经有4人回复
-
08工科求调剂286
已经有5人回复
-
学硕274求调剂
已经有13人回复
-
一志愿085600中科院宁波所276分求调剂
已经有7人回复
-
0817化工学硕调剂
已经有3人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
gaorongbest
新虫 (小有名气)
- 应助: 14 (小学生)
- 金币: 147.7
- 红花: 1
- 帖子: 103
- 在线: 18.3小时
- 虫号: 1726688
- 注册: 2012-03-30
- 性别: MM
- 专业: 细胞生物学研究中的新方法
【答案】应助回帖
★
wizardfan: 金币+1, 谢谢分享经验 2012-09-19 05:39:19
wizardfan: 金币+1, 谢谢分享经验 2012-09-19 05:39:19
|
我们转膜的时候都是200mA转膜2.5小时或80mA转过夜，对应的电压是不是80V就不清楚了（我只是说说我们的，仅供你参考，排查原因），转膜结束后先用苏丹红染色看是否转到膜上了（一般Marker用预染的，这样转膜后可以看到胶上没有Marker残留说明转到了膜上，不包括转过了，苏丹红染色有条带说明没转过），之后再封闭，2小时，按抗体要求加一抗二抗；你采用什么方式曝光的？一般都是30min内都可以看到了，时间长了背景也染色了，图片不漂亮。 你的Marker只看到一条，是哪一条？是较大的一条吗？如果是这样，就可能是转膜过了。 希望对你有帮助  |
zds2257
7楼2012-09-18 21:10:54
xiaoqi5992
银虫 (正式写手)
- BioEPI: 1
- 应助: 42 (小学生)
- 金币: 552.9
- 红花: 2
- 帖子: 407
- 在线: 187小时
- 虫号: 631148
- 注册: 2008-10-20
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
2楼2012-09-14 16:59:50
3楼2012-09-14 23:52:45
xiaoqi5992
银虫 (正式写手)
- BioEPI: 1
- 应助: 42 (小学生)
- 金币: 552.9
- 红花: 2
- 帖子: 407
- 在线: 187小时
- 虫号: 631148
- 注册: 2008-10-20
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
4楼2012-09-17 08:43:21
