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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 我做TA克隆，准备拿序列去测序。做完转化以后直接做个菌液PCR检验一下是否有目的
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fengyunqb

新虫 (小有名气)

[求助] 我做TA克隆，准备拿序列去测序。做完转化以后直接做个菌液PCR检验一下是否有目的

我做TA克隆，准备拿序列去测序。做完转化以后直接做个菌液PCR检验一下是否有目的条带就可以了吧？因为我的胶回收目的片段比较单一且比较亮。但老师说要蓝白斑筛选重组子。IPTG和X-gal.因为我没配过这东西。看能不能省掉呢？谢谢解答。
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1楼 2012-09-11 11:17:25
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fengyunqb

新虫 (小有名气)
引用回帖:
31楼: Originally posted by platanus at 2012-12-21 12:03:39
这个肯定是要做的啊，测序是需要单克隆的，而且即使你跑出来的条带单一，但是PCR过程中是有错配的。所以测序一定要挑单克隆才行，你如果不想做蓝白斑筛选的话就直接挑单菌落跑PCR就可以啦。

恩，谢谢，我直接PCR纯化测序的结果就不如单克隆的结果。
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32楼2012-12-22 09:26:43
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elbo

金虫 (小有名气)

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★
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fengyunqb: 金币+1 2012-09-12 09:37:15
肯定不能省  个人认为
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2楼2012-09-11 11:24:09
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aofeng860308

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
fengyunqb: 金币+1 2012-09-12 09:38:45
如果要做菌落PCR检测就可以不用蓝白斑筛选，PCR出来有目的条带就可以测序了。如果使用蓝白斑筛选，就可省略菌落PCR这一步。
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3楼2012-09-11 12:13:25
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mduaerp

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这个肯定不能省，测序的话要挑阳性单克隆，不然测序结果会不准确，甚至无法测序
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想的太多，做的太少
4楼2012-09-11 12:16:48
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