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qiuniao

铜虫 (小有名气)

[求助] 酶反应动力学中Km值的测定!

今天做了一组实验,前提是已经摸索了最佳pH和最佳反应温度。
然后今天设置了一系列不同浓度的底物 加等量的酶  同样的反应时间和对照组
我们是通过测底物的减少来求Km值
奇怪的是 实验组中底物的浓度居然比加进去的初始底物浓度还高???
在反应体系中,底物浓度已经是酶浓度的200倍了
求高人知道啊!
因为之前摸索最佳温度和最佳pH时 是用一个固定的底物浓度来做的 也没出什么问题  而且就在前几天做了最佳pH的摸索 在这个最佳pH条件下,酶的转化效率是13%  而今天也是同样的底物浓度 同样的酶浓度 在这个最佳pH下 转化效率只有4%  不求甚解啊!! 纠结啊!!
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