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glt0629

木虫 (小有名气)


[交流] P450酶活

最近在做P450的酶活实验,用7-乙氧基香豆素作为底物,可是发现我NADPH的荧光值很高,也就是说我的对照里面(即不加酶,只加7-乙氧基香豆素和NADPH,用PBS补足体积)的荧光值特别高,有时候比实验组还高,这是为什么呢?有遇到过这样问题的大侠们帮帮忙吧,还有就是用试卤灵做标曲,一般试卤灵的浓度是多少?用什么溶解试卤灵呢?麻烦大家帮我想想,非常感谢了。
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biolio2009

木虫 (著名写手)


★ ★ ★ ★
glt0629(金币+1): 谢谢参与
glt0629: 金币+3 2012-09-10 20:22:46
你的反应底物7-乙氧基香豆素,自己发生转化了,导致这个结果不是酶促反应的结果。
2楼2012-09-10 09:06:50
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glt0629

木虫 (小有名气)


引用回帖:
2楼: Originally posted by biolio2009 at 2012-09-10 09:06:50
你的反应底物7-乙氧基香豆素,自己发生转化了,导致这个结果不是酶促反应的结果。

关键是我不加底物也是这样,难道NADPH本来就有荧光值?这个荧光值不应该是7-乙氧基香豆素反应后生成7-羟基香豆素发出的荧光吗?谢谢,非常感谢你
11楼2012-09-10 20:22:28
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普通回帖

gkf123

至尊木虫 (文坛精英)


★ ★
glt0629(金币+1): 谢谢参与
glt0629: 金币+1 2012-09-10 20:23:30
????
3楼2012-09-10 09:33:48
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toughxu

木虫 (著名写手)


★ ★
glt0629(金币+1): 谢谢参与
glt0629: 金币+1 2012-09-10 20:24:03
路过,学习!!!
10楼2012-09-10 10:42:21
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gcworm

木虫 (职业作家)


★ ★
glt0629(金币+1): 谢谢参与
glt0629: 金币+1 2012-09-12 08:30:37
顶你
15楼2012-09-10 22:30:32
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biolio2009

木虫 (著名写手)


★ ★ ★
glt0629: 金币+2 2012-09-12 08:30:18
glt0629: 金币+1 2012-12-26 23:53:13
引用回帖:
11楼: Originally posted by glt0629 at 2012-09-10 20:22:28
关键是我不加底物也是这样,难道NADPH本来就有荧光值?这个荧光值不应该是7-乙氧基香豆素反应后生成7-羟基香豆素发出的荧光吗?谢谢,非常感谢你...

7-乙氧基香豆素  不会有荧光吧   你的空白  有没有荧光?
还有NADPH有没有荧光  分别测定后分析分析
17楼2012-09-11 22:24:11
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琚阳

新虫 (初入文坛)


★ ★ ★
glt0629(金币+1): 谢谢参与
glt0629: 金币+1 2012-11-26 20:40:15
glt0629: 金币+1 2012-12-26 23:53:05
你有没有关于p450与抗性相关的英文文献啊?
18楼2012-11-03 16:13:21
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xiuwei001

铁杆木虫 (正式写手)


★ ★ ★ ★
glt0629(金币+1): 谢谢参与
glt0629: 金币+3 2012-12-26 23:52:57
p450酶活测定要求比较高

不知道你的酶怎么提取的,最好用超高速离心机,大样本提取。

你用的是器官还是整个试材?这些都有影响。
19楼2012-12-04 20:59:57
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sszzpp4楼
2012-09-10 09:42   回复  
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glt0629: 金币+1 2012-09-10 20:23:35
wuzezhou5楼
2012-09-10 09:46   回复  
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行无人6楼
2012-09-10 09:49   回复  
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yaoyao1457楼
2012-09-10 09:59   回复  
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glt0629: 金币+1 2012-09-10 20:23:50
jeangong8楼
2012-09-10 09:59   回复  
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vaoing9楼
2012-09-10 10:06   回复  
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gyfwon16楼
2012-09-10 22:54   回复  
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