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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » P450酶活
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glt0629

木虫 (小有名气)

[交流] P450酶活

最近在做P450的酶活实验，用7-乙氧基香豆素作为底物，可是发现我NADPH的荧光值很高，也就是说我的对照里面(即不加酶，只加7-乙氧基香豆素和NADPH，用PBS补足体积)的荧光值特别高，有时候比实验组还高，这是为什么呢？有遇到过这样问题的大侠们帮帮忙吧，还有就是用试卤灵做标曲，一般试卤灵的浓度是多少？用什么溶解试卤灵呢？麻烦大家帮我想想，非常感谢了。
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1楼 2012-09-09 22:30:40
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biolio2009

木虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★
glt0629(金币+1): 谢谢参与
glt0629: 金币+3 2012-09-10 20:22:46
你的反应底物7-乙氧基香豆素，自己发生转化了，导致这个结果不是酶促反应的结果。
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2楼2012-09-10 09:06:50
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gkf123

至尊木虫 (文坛精英)
★ ★
glt0629(金币+1): 谢谢参与
glt0629: 金币+1 2012-09-10 20:23:30
????
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3楼2012-09-10 09:33:48
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toughxu

木虫 (著名写手)
★ ★
glt0629(金币+1): 谢谢参与
glt0629: 金币+1 2012-09-10 20:24:03
路过，学习！！！
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10楼2012-09-10 10:42:21
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glt0629

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by biolio2009 at 2012-09-10 09:06:50
你的反应底物7-乙氧基香豆素，自己发生转化了，导致这个结果不是酶促反应的结果。

关键是我不加底物也是这样，难道NADPH本来就有荧光值？这个荧光值不应该是7-乙氧基香豆素反应后生成7-羟基香豆素发出的荧光吗？谢谢，非常感谢你
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11楼2012-09-10 20:22:28
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gcworm

木虫 (职业作家)
★ ★
glt0629(金币+1): 谢谢参与
glt0629: 金币+1 2012-09-12 08:30:37
顶你
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15楼2012-09-10 22:30:32
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biolio2009

木虫 (著名写手)
★ ★ ★
glt0629: 金币+2 2012-09-12 08:30:18
glt0629: 金币+1 2012-12-26 23:53:13
引用回帖:
11楼: Originally posted by glt0629 at 2012-09-10 20:22:28
关键是我不加底物也是这样，难道NADPH本来就有荧光值？这个荧光值不应该是7-乙氧基香豆素反应后生成7-羟基香豆素发出的荧光吗？谢谢，非常感谢你...

7-乙氧基香豆素  不会有荧光吧   你的空白  有没有荧光？
还有NADPH有没有荧光  分别测定后分析分析
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17楼2012-09-11 22:24:11
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琚阳

新虫 (初入文坛)
★ ★ ★
glt0629(金币+1): 谢谢参与
glt0629: 金币+1 2012-11-26 20:40:15
glt0629: 金币+1 2012-12-26 23:53:05
你有没有关于p450与抗性相关的英文文献啊？
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18楼2012-11-03 16:13:21
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xiuwei001

铁杆木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
glt0629(金币+1): 谢谢参与
glt0629: 金币+3 2012-12-26 23:52:57
p450酶活测定要求比较高

不知道你的酶怎么提取的，最好用超高速离心机，大样本提取。

你用的是器官还是整个试材？这些都有影响。
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19楼2012-12-04 20:59:57
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sszzpp4楼
2012-09-10 09:42   回复  
glt0629(金币+1): 谢谢参与
glt0629: 金币+1 2012-09-10 20:23:35
wuzezhou5楼
2012-09-10 09:46   回复  
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glt0629: 金币+1 2012-09-10 20:23:38
行无人6楼
2012-09-10 09:49   回复  
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glt0629: 金币+1 2012-09-10 20:23:46
yaoyao1457楼
2012-09-10 09:59   回复  
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jeangong8楼
2012-09-10 09:59   回复  
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vaoing9楼
2012-09-10 10:06   回复  
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goingabroad12楼
2012-09-10 20:53   回复  
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yingying158813楼
2012-09-10 21:27   回复  
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jiaoyuanming14楼
2012-09-10 21:43   回复  
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gyfwon16楼
2012-09-10 22:54   回复  
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