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mahoumeimei

金虫 (小有名气)

[求助] fosmide克隆文库

各位,本人菜鸟,前段时间在文献上看到作者构建了fosmide克隆文库,看了半天也没太看懂。请问各位一般在什么情况下才需要构建fosmide文库啊?它除了插入片段长之外,还有什么其它特点吗?
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cexoihtydx

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
mahoumeimei: 金币+8, ★★★很有帮助, 非常感谢! 2012-09-12 15:05:09
小丹木木: 金币+5, MolEPI+1, 几个回复一起给予EPI,欢迎常来 2012-09-12 16:02:06
引用回帖:
7楼: Originally posted by mahoumeimei at 2012-09-12 08:40:32
我看不太懂。貌似是直接对阳性克隆提取质粒DNA,然后针对目的基因做PCR,再建立目的基因的克隆文库。...

一方面,提取的样本基因组总DNA是十分复杂的,其中的很多成分也会对PCR起到抑制作用,如果不构建fosmid文库,直接进行PCR,克隆成功的概率很低,毕竟要受到目的基因在基因组中的丰度高低的影响;另一方面,构建fosmid文库后,会将基因组DNA中大量的基因插入到fosmid质粒中,可在大肠杆菌中保存,后续只需培养大肠杆菌即可进行基因组信息的复制(即提取质粒即可)。希望你能明白。很多文献中会有更详细的介绍。
不放弃,日子总有阳光,追求总有希望!
8楼2012-09-12 12:38:31
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cexoihtydx

金虫 (正式写手)


小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-09-10 13:46:28
这包含的东西就多了。不同文库使用的载体不同,要根据你需要研究的基因大小来决定。插入片段大的载体文库,便于研究大片段的基因或基因上下游的调控序列;插入片段小的文库便于研究基因片段较小的基因,测续费用也会降低。多看看文献就知道了
不放弃,日子总有阳光,追求总有希望!
2楼2012-09-09 23:14:54
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mahoumeimei

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cexoihtydx at 2012-09-09 23:14:54
这包含的东西就多了。不同文库使用的载体不同,要根据你需要研究的基因大小来决定。插入片段大的载体文库,便于研究大片段的基因或基因上下游的调控序列;插入片段小的文库便于研究基因片段较小的基因,测续费用也会 ...

非常感谢!不过我看的那篇文献,其实研究的目的基因只有700bp,但是作者先构建了fosmide文库,然后再提取质粒DNA,针对目的基因做PCR,再建克隆文库,然后进化分析。我不懂,为什么之前要先建fosmide文库?
3楼2012-09-10 09:29:27
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cexoihtydx

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
mahoumeimei: 金币+7, ★★★很有帮助 2012-09-11 10:23:11
他拿什么DNA材料构建fosmid文库啊?一般建库成功后,可以用于很多基因的研究,在你看的文献中只是从构建的库中成功克隆了这个基因,如果他克隆了其它的基因,也完全可以按照同样的思路来论述。
不放弃,日子总有阳光,追求总有希望!
4楼2012-09-10 18:44:15
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