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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PCR问题
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阿蒙and阵阵

金虫 (初入文坛)

[求助] PCR问题

我想问一下，最近在做基因组的PCR，总是P不出来，用的体系都是之前别人用过的，以前能做出来，但是我做不出来，不知道是哪里的问题，请大家指导一下
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1楼 2012-09-06 09:20:25
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王平阳

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-09-06 13:52:57
如果多次都P不出来，出现问题的可能性就比较广，建议逐一排查，首先用常规基因做PCR，排除PCR试剂可能出现的问题，然后重提DNA，再做，还不行就设计几个退火温度梯度，看是不是程序问题，再不行就是引物问题或者基因组没有目的基因，祝好运!
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阿蒙and阵阵
没有做不到，只有想不到！
6楼2012-09-06 12:28:55
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zishilanxuan

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我也是一样，我的目的基因是1900左右，昨天p出来一个500左右的，顺便问一下，我这个可能是什么问题呢？
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2楼2012-09-06 09:40:10
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gwd0312

木虫 (正式写手)

“无冕之王”

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
体系是很重要，P不出来也是因为基因不同吧。建议将引物和dNTP的量加大点；另外你的PCR程序也可以做适当调整。祝好运！！
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持之以恒、永不放弃！
3楼2012-09-06 09:44:29
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gwd0312

木虫 (正式写手)

“无冕之王”

【答案】应助回帖

引用回帖:
2楼: Originally posted by zishilanxuan at 2012-09-06 09:40:10
我也是一样，我的目的基因是1900左右，昨天p出来一个500左右的，顺便问一下，我这个可能是什么问题呢？

我当初做的时候一次设计了三对引物，如果你的引物特异性不强，可能P出不同的结果，即使你用同样的体系，同样的程序，我碰到过。祝好运！！
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持之以恒、永不放弃！
4楼2012-09-06 09:46:51
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