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欧阳晓晨

新虫 (初入文坛)

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[求助] 黑曲霉纤维素酶活测定遇到问题！求解。。。

我使用国标农用微生物菌剂中的纤维素酶活测定方法，也就是DNS测定法，可是我做了很多次，算出来的酶活都是300--1000，今天老师让我测定一个样品，我测出来是1125，可她告诉我，北京质检中心测定的是4.84，我就奇怪了，按照这个国标里的计算公式，不可能测出4.84的。具体过程如下，请大家看看有什么问题没。先谢过！

1、用100ug/ml的标准葡萄糖，在试管中稀释不同倍数来绘制标准曲线，但葡萄糖稀释液的总量保证是5ml，然后加入3ml的DNS试剂，沸水浴5分钟，水冷，在490nm下测定OD，绘制标准曲线。
2、样品取10g，加入100ml水，静置20分钟，震荡半小时，四层纱布过滤，然后3000转/分离心十分钟，此时稀释倍数K是10。
3、三个试管，一个空白，两个对照，对照里加入1ml的样品溶液，再加入4ml的60℃的CMC缓冲液，之后放入60度水浴锅内加热20分钟，取出后立即加入3ml的DNS试剂，放入沸水浴里五分钟，水冷，490nm测定OD。
4、纤维素酶活公式 U=k×（m1-m2）/20.

.如果按照质检中心测定的U是4点多的话，这个葡萄糖的m差值就应该在10ug左右，但是我的标准曲线里，400ug的葡萄糖的OD值已经是0.003，10ug根本就显示不出来，他们是怎么测定出5的？？请做过给指点下吧，谢谢！！

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